Диагностические тесты для обнаружения коронавирусной инфекции основаны на выявлении элементов вируса: РНК или белка. В обоих случаях выбирается уникальный элемент SARS-CoV-2, чтобы снизить риск перекрестной реакции со сходными вирусами. Вирион (внеклеточная форма вируса) SARS-CoV-2, как и другие коронавирусы, по своей форме чем-то напоминает мяч с шипами – то самое растиражированное изображение COVID-19. «Шипы» образованы шиповидным белком (S) и отвечают за взаимодействие вируса с клеткой хозяина и проникновение в нее. Шиповидные белки уникальны для каждого вида коронавируса. Оболочка вируса образована липидной мембраной, позаимствованной у клетки хозяина, с включением вирусных белков оболочки Е и М. Именно эти два белка участвуют в образовании вирионов и в поддержании их сферической формы. Внутри вириона находится его генетический материал, молекула РНК, упакованная вместе с белками нуклеокапсида (N). Вместе РНК и белки N образуют структуру, сходную с бусинами на нитке. Это позволяет свернуть длинную цепочку РНК в компактную форму. Генетический код разных видов коронавирусов во многом схож. Например, геномы вирусов SARS и SARS-CoV-2 похожи больше чем на 80%. Но и различий вполне достаточно, они и используются в дизайне диагностических тестов: для теста выбираются уникальные последовательности генома и белки, присущие определенному вирусу.
ПЦР-тест
Этот тест основан на обнаружении генетического материала вируса в биологическом образце методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).
Метод использует праймеры – короткие цепочки нуклеиновых кислот, специально подобранные для распознавания уникальных мишеней-последовательностей в геноме вируса, и полимеразу – фермент, который создает из праймеров, распознавших участки вируса, более длинные цепочки, копию вирусного гена. Праймеры и полимераза работают вместе только в том случае, если в образце есть генетический материал вируса.
В случае коронавируса в тест-системах используются разные гены по выбору производителя. В некоторых тестах может быть задействовано более одной мишени, что повышает чувствительность и специфичность.
Чаще всего в качестве мишеней используются гены нуклеопротеина (N), шиповидного белка (S) или РНК-зависимой РНК полимеразы (RdRP). Уникальные последовательности праймеров для любой из тест-систем были выбраны на основе анализа сходных коронавирусов и являются уникальными для SARS-CoV-2.
Это позволяет исключить инфекцию другим коронавирусом как причину положительного теста на ковид. Материал для теста получают при помощи мазка из носоглотки или носа, иногда бронхов.
Слюна тоже может быть использована для анализа, но вероятность ложно-отрицательного теста в таком случае выше из-за более низкой концентрации вируса. Вероятность ложноположительного ПЦР теста достаточно низкая и чаще всего связана сo случайным попаданием вируса в образец пациента при заборе материала на анализ.
Чувствительность теста в среднем — около 95%, специфичность — около 98%. Чувствительность ПЦР-теста в реальных условиях может быть ниже в определенных тест-системах, а также при низкой вирусной нагрузке, которая зависит как от дня от начала заболевания, так и от индивидуальной реакции пациента на вирусную инфекцию.
Чувствительность экспресс-тестов ниже стандартных лабораторных тестов. В связи с высокой чувствительностью теста генетический материал вируса может быть обнаружен даже спустя несколько недель после острой инфекции.
В большинстве случаев выздоровевшие пациенты не заразны после двух недель от начала симптомов, несмотря на положительный тест. Исключение представляют собой пациенты с сильной иммуносупрессией, как, например, при химиотерапии лимфомы.
У таких людей вирус может оставаться активным и способным к заражению продолжительное время.
Главный внештатный пульмонолог Минздрава России Сергей Авдеев заявлял, что примерно в 30-40% случаев ПЦР-тест на коронавирус может дать ложноотрицательный результат. Но к качеству тестов в Минздраве претензий нет — ошибки там связывают с тем, как осуществляется забор проб.
Тесты на антигены коронавируса
Тесты на антигены вируса основаны на выявлении частиц вируса в исследуемом материале. Осуществляется это при помощи антител, которые распознают белки вируса – антигены. Большинство тестов на данный момент построено на обнаружении шиповидного белка вируса SARS-CoV-2.
Тесты на антиген вируса требуют меньше времени, могут быть сделаны вне лаборатории и стоят дешевле, чем ПЦР-тесты. Но при этом их чувствительность ниже, около 56%, хотя специфичность остается высокой и достигает 98%. Тест на антиген коронавируса может быть сделан по анализу из носа или носоглотки, а также по анализу слюны.
Поскольку тест дает быстрый ответ при достаточно низкой чувствительности, его часто комбинируют с ПЦР-тестом, что снижает частоту ложноотрицательного результата у пациента.
Использование диагностических тестов
ПЦР-тест и антигенный тест чаще всего используются для диагностики острой коронавирусной инфекции. Положительный, как и отрицательный результат теста должны интерпретироваться исходя как из истории болезни, так и из клинической картины заболевания.
Если у пациента есть симптомы COVID-19 и он контактировал с больным с подтвержденной коронавирусной инфекцией, то отрицательный тест не означает отсутствие у него коронавирусной инфекции. Диагностические тесты (ПЦР и антигенный) также используются для скрининга бессимптомных пациентов, чтобы отследить цепочки заражения и последующей изоляции.
В некоторых странах этот тест требуется перед операциями и процедурами, а также химиотерапией.
Серологические тесты — на антитела
Серологические тесты определяют наличие в крови пациента антител — иммуноглобулинов, выработанных в ответ на инфекцию. Насчитывается пять классов иммуноглобулинов. Из них три класса, IgM, IgG и IgА являются основными в иммунной защите организма.
Антитела – это сложные белки с несколькими функциями. Они способны не только распознавать специфические патогены, но и активировать защитные механизмы организма, позволяющие нейтрализовать и уничтожить вирусы и бактерии. Антитела – часть приобретенного иммунитета, поэтому их наличие в крови сигнализирует о встрече с определенным патогеном и подтверждает прошлую инфекцию.
При бактериальной инфекции развитие специфического иммунного ответа достаточно предсказуемо. Первыми на инфекцию реагируют клетки неспецифического иммунитета – нейтрофилы, макрофаги и моноциты. Их задача – найти и обезвредить врага, что они могут сделать и без наводки антител.
Дальше к делу подключается специфический иммунитет, способный распознать чужака и более эффективно его нейтрализовать, а также не дать ему вызвать инфекцию при повторном попадании в организм. За специфический иммунитет отвечают лимфоциты: В- и Т-клетки.
Координация работы специфического иммунного ответа сложна и в определенной степени хаотична: организм определяет нужные антитела и клетки путем подбора из множества вариантов в процессе взаимодействия нескольких видов клеток.
Те самые иммуноглобулины, которые способны защитить организм в будущем – дело совершенно случайной, но удачной мутации.
В большинстве клеток организма мутация, или изменение генома, не приветствуется. Но лимфоциты – исключение из этого правила. Определенные участки генома этих клеток активно мутируют, чтобы создать целую картотеку рецепторов для возможных врагов. Каждый из этих рецепторов может распознать один эпитоп – участок антигена.
У В-клеток в качестве рецептора используется иммуноглобулины М и D, прикрепленные к поверхности клетки. У Т-клеток ту же роль играет белок сходной конструкции с добавочной функцией распознавания хозяина. При встрече с подходящим антигеном В-клетка способна не только распознать его, но и начать запуск антител.
Т-клетки необходимы для активации В-клеток, а также для распознавания клеток организма, зараженных бактериями или вирусами.
Производство иммуноглобулинов обычно начинается с иммуноглобулина М, а потом переходит к иммуноглобулину класса G.
Переход сопровождается дальнейшей подгонкой иммуноглобулина к эпитопу, в результате чего отбираются В-клетки с иммуноглобулинами, еще более точно распознающими эпитоп и более тесно связывающие его. Способность иммуноглобулина связывать антиген называется аффинностью.
С течением инфекции и при повторной встрече с бактерией или вирусом аффинность увеличивается. Таким образом, в самом начале инфекции обычно обнаруживаются антитела класса М, а со временем их вытесняют антитела класса G.
Однако в случае коронавируса ситуация далека от классической. Антитела классов М и G к нескольким эпитопам вируса (нуклеокапсид и шиповидный белок) в отдельных случаях коронавирусной инфекции можно обнаружить уже на четвертый день от начала инфекции.
Антитела IgG и IgM иногда можно обнаружить уже на четвертый день от начала инфекции
В то же время чувствительность серологических тестов в первые две недели от начала симптомов остается крайне низкой, всего около 30%. Чувствительность значительно повышается после второй недели заболевания и достигает 72%.
Антитела класса М могут быть обнаружены в крови и спустя несколько недель после острой инфекции, поэтомы не являются индикатором риска заражения.
Диагностика осложняется выбором антигенов для анализа: в некоторых тест-системах для определения антител используется нуклеокапсид вируса, в других – шиповидный белок, в третьих – часть шиповидного белка, отвечающая за взаимодействие вируса с клеткой – рецептор-связывающих домен.
Чувствительность теста можно повысить, если использовать сразу несколько антигенов или же включить в тест IgG и IgМ.
Во многих странах на рынке уже появились тест-системы самых разных компаний и продолжают появляться новые, что затрудняет интерпретацию серологических тестов без информации о конкретной тест-системе.
Уровень антител может определяться как качественно (антитела обнаружены/отсутствуют), так и количественно, с определением уровня или титра антител по шкале, выбранной производителем.
Использование серологических тестов
Серологические тесты не рекомендуется использовать для диагностики острой коронавирусной инфекции, поскольку их чувствительность в первую неделю заболевания слишком низкая.
В то же время они могут служить подтверждением недавней коронавирусной инфекции при соответствующей клинической картине и отрицательном ПЦР или антиген-тесте.
Делать такой анализ стоит не раньше, чем по прошествии двух недель от начала симптомов, поскольку до этого уровень антител может быть слишком низким для достоверного результата.
Тест на антитела надо сдавать не раньше, чем через две недели после появления симптомов
Серологические тесты должны интерпретироваться с крайней осторожностью в целях определения защитного иммунитета к коронавирусу SARS-CoV-2.
Далеко не все тест-системы могут выявить нейтрализующие антитела, то есть антитела, предотвращающие проникновение вируса в клетку. Поэтому стоит уточнить, что именно может определить тот или иной тест перед тем, как сдавать анализ. Иммунный ответ на коронавирусную инфекцию всё ещё недостаточно изучен.
На данный момент неизвестно, дают ли антитела долгосрочную защиту, а также какой уровень антител необходим для этого: исследования показали как длительную циркуляцию антител в крови, так и их достаточно быстрое исчезновение.
О том, что нейтрализующие антитела позволяют избежать инфекции, можно судить по публикациям о вспышках коронавирусной инфекции, в которых не заболевшими были люди с нейтрализующими антителами.
Повторные случаи инфекции были выявлены, но пока публикаций об этом недостаточно, чтобы понять факторы риска повторного заражения, в том числе, чтобы определить, связано ли оно с падением титра антител.
Серологический анализ, доступный в большинстве коммерческих лабораторий, не позволяет определить способность нейтрализующих антител защитить от любого штамма коронавируса.
Поэтому серологические тесты на данный момент не дают достоверного представления ни о степени защиты от повторного заражения, ни о времени, в течение которого человек защищен от коронавирусной инфекции, ни о том, что такая защита будет эффективна от другого штамма вируса.
Тесты для диагностики коронавирусной инфекции чаще всего используются для подтверждения клинического диагноза. Результат теста стоит интерпретировать, исходя из вероятности диагноза еще до проведения теста.
Эта вероятность конкретно для коронавирусной инфекции определяется клинической картиной, историей инфекционных контактов, а также эпидемиологической обстановкой – заболеваемостью среди населения.
Таким образом, отрицательный ПЦР-тест у пациента с кашлем, высокой температурой и одышкой, а также недавним близким контактом с человеком с уже подтвержденной коронавирусной инфекцией, не может полностью исключить COVID-19. В то же время тест на скрининге бессимптомного пациента без известных ему заразных контактов может оказаться ложноположительным.
B оптимальных условиях консультация специалиста поможет определить стратегию тестирования и интерпретацию диагностических тестов c учетом истории инфекционных контактов, симптомов и хода заболевания.
подпишитесь на регулярные пожертвования
Как работает ПЦР тест на коронавирус
ПЦР-тестирование (также известное как тестирование полимеразной цепной реакции) — это тип лабораторного исследования, который сообщает, есть ли у кого-то в настоящее время COVID-19. Этот вид диагностики в отличие от экспресс-тестов, которые проверяют наличие антител в крови, выявляет непосредственно наличие вируса в организме.
ПЦР-тестирование проводится в лаборатории и может помочь найти даже крошечное количества вируса. Это достигается за счет усиления генетического материала вируса до уровня, на котором он может быть обнаружен. Для теста требуется образец от человека.
Этот образец собирается врачом, обычно с помощью тампона, вводимого человеку в нос или горло.
ПЦР-тесты используются для непосредственного определения наличия антигена, а не наличия иммунного ответа организма или антител. Обнаруживая вирусную РНК, которая будет присутствовать в организме до того, как сформируются антитела или появятся симптомы заболевания, тесты могут определить, есть ли у кого-то вирус на очень ранней стадии.
Кому и когда нужно проходить диагностику
ПЦР-тест на COVID-19 необходим, если:
- У вас есть симптомы COVID-19, такие как жар, кашель, усталость или затрудненное дыхание.
- У вас нет симптомов, но у вас был тесный контакт (в пределах 1,5 м в общей сложности 15 минут или более) с кем-то, у кого положительный результат теста на вирус COVID-19 или есть подозрение на его наличие.
Ваш врач, другой медицинский работник или отдел общественного здравоохранения порекомендуют пройти тест. Определенные группы считаются высокоприоритетными для диагностического тестирования. К ним относятся люди с признаками и симптомами COVID-19, которые:
- Работают в медицинском учреждении или в качестве служб быстрого реагирования.
- Живут или работают в учреждениях долгосрочного ухода, таких как дома престарелых, или других местах, где люди проживают вместе, например, в тюрьмах или приютах.
- Находятся на лечении в больнице.
Другим людям может быть предоставлен приоритет для тестирования в зависимости от рекомендаций местного департамента здравоохранения по мониторингу COVID-19 в отдельных сообществах.
Как работает ПЦР
ПЦР проводится в 3 основных этапа. Эти три шага повторяются в течение 30 или 40 циклов. Циклы выполняются на автоматическом циклическом устройстве, которое быстро нагревает и охлаждает пробирки, содержащие реакционную смесь.
Каждый этап – денатаурация (изменение структуры), отжиг (соединение) и растяжение — происходит при разной температуре:
- Денатурация: при 94 ° C (201,2 F) двухцепочечная ДНК плавится и раскрывается на два фрагмента одноцепочечной ДНК.
- Отжиг: при средних температурах, около 54 ° C (129,2 F), праймеры образуют пары (отжиг) с одноцепочечной «матрицей» (матрица — это последовательность ДНК, которую нужно скопировать). На небольшой длине двухцепочечной ДНК (объединенный праймер и шаблон), полимераза присоединяется и начинает копировать шаблон.
- Удлинение: при 72 ° C (161,6 ° F) лучше всего работает полимераза, и строительные блоки ДНК, комплементарные матрице, соединяются с праймером, образуя двухцепочечную молекулу ДНК.
За один цикл одиночный сегмент двухцепочечной ДНК-матрицы амплифицируется в два отдельных фрагмента двухцепочечной ДНК. Эти две части затем доступны для усиления в следующем цикле. По мере повторения циклов создается все больше и больше копий, а количество копий шаблона увеличивается в геометрической прогрессии.
На последнем, четвертом этапе к рецепторным участкам на РНК присоединяется индикатор, который, затем, окрашивается на контрольном и/или тестовом участке тест-кассеты.
Как проводится диагностика
Для диагностического теста на COVID-19 медицинский работник берет образец слизи из носа, горла или образец слюны.
Образец, необходимый для диагностического тестирования, можно взять в кабинете врача, в медицинском учреждении, в центре тестирования или на дому (а некоторых ситуациях выезд лаборанта возможен на дом). Рекомендуется использовать длинный мазок из носа (мазок из носоглотки), хотя мазок из зева приемлем.
Врач или другой медицинский работник вставляет в нос пациента тонкую гибкую палочку с ватой на кончике или проводит тампоном по задней стенке горла, чтобы собрать образец слизи. Это может быть несколько неприятно.
Что касается пробы из носа, мазок может производиться в обеих ноздрях, чтобы собрать достаточно слизи для анализа. Тампон ненадолго остается на месте, прежде чем его осторожно поворачивают при извлечении. Образец герметично закрывается в пробирке и отправляется в лабораторию для анализа.
Что влияет на результат тестирования
Технические проблемы, включая загрязнение во время отбора проб (например, тампон случайно касается загрязненной перчатки или поверхности), загрязнение ампликонами ПЦР, загрязнение реагентов, перекрестное загрязнение образца и перекрестные реакции с другими вирусами или генетическим материалом — основные причины ложных результатов исследования.
Но кроме технических проблем на информативность исследования влияет правильная подготовка. Пациент должен быть проинформирован о том, что за 4 часа до тестирования он не может курить, есть, жевать жвачку, чистить зубы или полоскать рот ополаскивателем.
Современная альтернатива ПЦР
Более современным и удобным способом тестирования на вирусные антигены является экспресс-тестирование, которое использует ту же индикаторную реакцию, что и классический ПЦР тест, но без первых трех этапов, связанных с повышением количества специфических отрезков вирусной РНК. Это стало возможным благодаря более чувствительному индикатору. Использование этих тестов заметно сокращает время тестирования (время проведения теста — всего 15 минут)
Приобрести экспресс тесты на выявление вирусных антигенов можно по ссылке: ПЦР Тест мазок Сovid 19 для выявления антигена коронавируса Экспресс-тест на COVID-19 (коронавирус) N-COV-19 RAPID (Великобритания)
03.12.2020 Белянчиков Юрий
Когда надо сдавать тест на антитела, а когда – ПЦР-анализ? А как пройти тест на COVID-19 и не получить ложный результат? Вот ответы
Разобрались, когда надо сдавать ПЦР-анализ, а когда – тест на антитела к COVID-19, чтобы получить максимально точный результат.
В чем разница между пцр-тестом и тестом на антитела к covid-19 (экспресс-тестом)
Если помните, CityDog.by писал, что во время ПЦР-теста делают мазок из носа или зева пациента. Из образца слюны или мокроты врачи берут клетку, из которой вычленяют РНК вируса. Метод полимеразной цепной реакции, или ПЦР, выявляет даже небольшое количество генетического материала коронавируса.
Однако высокие концентрации вируса содержатся в выделениях из носоглотки только на ранних стадиях инфекции. Экспресс-тесты же показывают, был ли человек инфицирован COVID-19, даже после того как болезнь отступила.
Все потому, что тесты на антитела к COVID-19 ищут не сам вирус, а следы иммунного ответа на него. Так, на сайте лаборатории «Синэво» поясняют, что тест на антитела к COVID-19 определяет наличие антител класса M и G в крови.
После анализа на антитела возможны три результата, которые обычно интерпретируют так
- Положительный результат на иммуноглобулины М (IgM): вы болеете COVID-19 прямо сейчас;
- Положительный результат на иммуноглобулины G (IgG): вы уже перенесли коронавирусную инфекцию;
- Отрицательные результаты на IgM и IgG: коронавирусной инфекции в организме нет.
ВАЖНО. На сайте «Синэво» уточняют: отсутствие антител M и G в крови может быть и в том случае, если исследование провели слишком рано. Поскольку анализ делает выводы на основе антител, он лучше выявляет ослабевающую или уже побежденную организмом вирусную инфекцию.
Кстати, про тесты на антитела: чем конкретно отличаются антитела класса М (IgM) и G (IgG)? И когда они проявляются?
Иммуноглобулины класса M (IgM) – это ранние антитела, объясняют на сайте лаборатории «Инвитро». Обычно их можно обнаружить в крови не раньше 1–2 недель от момента контакта с возбудителем и не ранее 5 дней от появления симптомов.
Выявить антитела класса M можно в течение только 2-3 месяцев: после этого времени IgM-антитела полностью сменяются на IgG. Именно поэтому обнаружение антител класса М говорит о недавнем инфицировании SARS-CoV-2.
Иммуноглобулины класса G (IgG) начинают определяться в крови примерно через 3–4 недели после контакта с вирусом. Чтобы анализ их обнаружил, с момента появления симптомов СOVID-19 у пациента должно пройти не меньше 2–3 недель.
Медики уточняют, что иногда IgG появляются практически одновременно с IgM, но остаются в крови 10 недель и дольше. По наличию и уровню IgG-антител врачи говорят о факте инфицирования в прошлом и, возможно, о выработке специфического иммунного ответа – способности организма распознать вирус при повторной встрече с ним.
Если результат анализа на антитела неясен, медлаборатория предлагает пересдать тест с интервалом в 7–10 дней, чтобы посмотреть на уровень антител классов М и G в динамике.
Когда надо делать тест на антитела, а когда – ПЦР-тест?
Лаборатория «Синэво» напоминает, что антитела (даже те, которые указывают на активную фазу заболевания) появляются не сразу, а после развития COVID-19. При этом ПЦР-тест показывает заболевание даже в инкубационном периоде.
Поэтому в лаборатории предлагают такую схему для своевременного тестирования.
На сайте invitro.by также пишут, что у инфицированных пациентов во время инкубационного периода и на ранних стадиях инфекции возможен отрицательный результат теста на антитела.
А вот интересная информация от производителя тестов на антитела класса G: на сроке более 14 дней от появления симптомов процент выявления антител IgG – 96,8%, на сроке 8–13 дней – 86,4%, 3–7 дней – 26%, до 3 дней – 0%.
Что будет, если сдать тест на антитела раньше времени?
По словам главного внештатного инфекциониста комитета по здравоохранению Мингорисполкома по инфекционным и паразитарным заболеваниям Никиты Соловья, все методы диагностики должны применяться на конкретной стадии инфекции, пишет kp.by.
- Если сделать тест на антитела заранее, можно получить ложноотрицательный результат.
- – Так, для выработки антител коронавирусу необходимо время, поэтому тесты на определение антител могут быть ложноотрицательными в первые дни коронавирусной инфекции и показывать результат лишь после 7–10-го (у некоторых пациентов – 14-го) дня заболевания, когда иммунная система наработает антитела в достаточном количестве, чтобы выявить их системой, – объяснил Никита Соловей.
- В случае с ПЦР все наоборот: чтобы получить более точный результат, его рекомендуют делать в первые дни после появления симптомов коронавируса.
- – Тест ПЦР (полимеразная цепная реакция), наоборот, показан в первые дни заболевания, поскольку по мере дальнейшего течения инфекции чувствительность этого метода снижается – вирус уже перестает выделяться из верхних отделов дыхательных путей, и мы не можем его поймать, используя этот метод.
На этой схеме от «Синэво» видно, в какой период времени существует максимальная вероятность получить положительный результат анализа на коронавирус разными методами. Обратите внимание: хотя иммуноглобулины класса M могут появляться и на 7-й день с момента проявления симптомов, их концентрация в крови увеличивается только после 14-го дня.
Как долго в крови переболевшего сохраняются антитела?
- Несмотря на то что коронавирус с нами почти год, однозначного ответа на этот вопрос пока нет.
- Летом ученые из Медицинского университета Чуцина опубликовали в журнале Nature Medicine исследование, где получалось, что антитела к коронавирусу сохраняются только два или три месяца после заражения СOVID-19, писали CNBC.
- В более позднем исследовании врачей из медицинского центра Маунт Синай (США), опубликованном в журнале Science, результаты получились оптимистичнее.
Медики изучили данные 30 082 человек, прошедших скрининг в Маунт Синай, с легкой и умеренной формой коронавируса.
Почти у всех испытуемых обнаружили устойчивые иммуноглобулины G, которые оставались стабильны в течение как минимум 5 месяцев.
Эти данные подтверждает исследование медиков в Иокогаме, о котором рассказал японский телеканал NHK. Они утверждают, что антитела у людей, переболевших СOVID-19, сохраняются как минимум на полгода и уменьшают риск заболеть повторно. Еще через полгода медики планируют проверить участников исследования заново, чтобы узнать, сохранятся ли антитела в течение года.
ВАЖНО: даже в случае положительного результата на IgG обязательно соблюдение мер социального дистанцирования и использование средств индивидуальной защиты.
Насколько точны тесты на коронавирус? Вот мнение доктора Комаровского
Доктор Евгений Комаровский считает, что и ПЦР-тесты, и тесты на антитела нельзя рассматривать как догму. Известный украинский педиатр пишет, что наличие или отсутствие антител еще ни о чем не говорит: можно переболеть коронавирусом и получить отрицательные анализы.
«У меня в окружении есть люди, которые по симптоматике явно перенесли коронавирусную инфекцию, но в одной лаборатории антитела у них обнаруживают, а в другой в тот же день – нет», – пишет Евгений Комаровский.
Он говорит, что лечение должно в первую очередь зависеть от симптомов, а не от результатов теста.
Многие медицинские лаборатории уточняют, что тест для определения антител классов М и G – это вспомогательный метод диагностики COVID-19. Его результат должен интерпретировать врач.
Доктор Комаровский обращает внимание на то, что в США регулярно публикуют данные об ошибочных результатах тестов.
«Почему мы с вами не имеем регулярных отчетов о том, где и какой процент результатов ошибочный? Почему не выявляют такие лаборатории и не обнародуют данные?» – задается вопросом Комаровский.
Если результат не всегда верный, зачем вообще сдавать тест на антитела?
На сайте invitro.by пишут, что тестирование на антитела рекомендуется:
- Как дополнительный метод диагностики.
- При невозможности исследования мазков методом амплификации нуклеиновых кислот (ПЦР-анализ. – Ред.).
- Для выявления людей с бессимптомной формой инфекции.
- Для установления факта перенесенной ранее инфекции.
- Для отбора потенциальных доноров иммунокомпетентной плазмы.
Кроме того, лаборатория напоминает, что массовое тестирование на антитела помогает понять масштабы пандемии и проследить формирование коллективного иммунитета к COVID-19 (коллективный иммунитет образуется, когда доля людей с иммунитетом к заболеванию достаточно велика, чтобы помешать передаче вируса в обществе. – Ред.).
Найти подробности можно тут: Когда в Беларуси появится коллективный иммунитет к COVID-19? Вот как считает врач
Недавно медицинская компания «Инвитро» подвела итоги 3 месяцев тестирования белорусов на антитела к коронавирусу. За это время тесты на определение антител класса G к COVID-19 прошло более 11 000 человек по всей стране.
По результатам исследования, антитела класса G к коронавирусной инфекции выявлены у 24% пациентов, обратившихся в «Инвитро». В компании говорят, что данные по регионам распределились практически одинаково: антитела класса G в каждой из областей обнаружены у от 22% до 26% пациентов.
Перепечатка материалов CityDog.by возможна только с письменного разрешения редакции. Подробности здесь.
synevo.by.
Диагностические тест-системы для практикующего врача (серия “НикоКард”) | #06/98 | «Лечащий врач» – профессиональное медицинское издание для врачей. Научные статьи
I. Тест-система “НикоКард — СРБ”. Одним из главных индикаторов воспаления у человека является С-реактивный белок (СРБ). СРБ — уникальный маркер острофазного ответа организма и степени его выраженности, он является самым чувствительным (увеличение в 20-100 раз, в отдельных случаях в 1000 раз) и самым быстрым (в первые 6-8 часов) показателем какого-либо повреждения [5].
Для адекватного количественного определения СРБ в сыворотке используются как сложнейшие радиоиммунологические, турбидиметрические, нефелометрические, иммуноферментные методы, так и “простая” радиальная иммунодиффузия [1, 2].
Для их реализации требуется длительная пробоподготовка и проведение сложных анализов, а также специальное оборудование и квалифицированный персонал.
В то же время для практикующего врача (например, терапевта на приеме) из-за скорости развития многих заболеваний, при которых важно определение СРБ, возникает необходимость в быстром, легко интерпретируемом, безынструментальном и количественном тесте, пригодном для работы как с сывороткой/плазмой, так и с цельной кровью.
Этим требованиям, по нашему мнению, соответствует диагностическая система “НикоКард — СРБ” (“Никомед-Диагностик”, Норвегия) [9].
Тест “НикоКард — СРБ” работает по иммунометрическому/иммунофильтрационному принципу и состоит из: 1) кроверазводящей и лизирующей (для цельной крови) жидкости; 2) 4 или 8 карточек с шестью отверстиями, содержащими специфические моноклональные антитела против СРБ, иммобилизированные на порах мембраны, которая расположена на абсорбирующей бумаге, и 3) СРБ-специфических моноклональных антител, конъюгированных с ультрачастицами коллоидного золота.
Для забора крови из пальца используют стеклянные капилляры, предварительно обработанные антикоагулянтом (цитратом, гепарином или ЭДТА) и высушенные в сушильном шкафу. Полученную кровь разводят реагентом (25 мкл к 1000 мкл), тщательно перемешивают и выдерживают 40-60 сек для лизиса клеток.
Затем 25 мкл разведенного образца крови вносят в одно из отверстий пористой мембраны, и после ее полной сорбции наносят по очереди каплю коньюгата и затем промывающего раствора для удаления непрореагировавших компонентов.
Стойкое пурпурно-красное окрашивание диаметром 3,5 мм появляется сразу же, если проба содержала СРБ (5-10 мг/л). Концентрацию СРБ можно определить полуколичественно визуально.
Быстрое и точное определение концентрации СРБ в мг/л осуществляется с помощью универсального портативного денситометра “НикоКард — Ридер”. Вся процедура анализа обычно длится 2-3 мин.
| Патофизиологическая основа определения Д-димера — катаболизм фибринового сгустка |
У здоровых индивидуумов уровень сывороточного СРБ обычно ниже 5-10 мг/л. Повышенные концентрации СРБ отмечаются через 6-12 часов после начала воспалительной реакции и достигают максимальных значений в пределах 48-72 часов.
СРБ имеет относительно короткий период полужизни (1-2 дня) и обычно возвращается к норме через 5-10 дней после начала воспаления, поэтому быстрота и точность его определения имеют существенное значение для постановки и уточнения диагноза.
Например, для дифференциальной диагностики между вирусной и бактериальной пневмониями, бронхитами и другими инфекционными состояниями.
Кроме того, измерение уровня СРБ с помощью набора “НикоКард — СРБ” непосредственно на приеме у врача позволяет быстро решить вопрос о назначении (или неназначении) того или иного вида лечения: антибиотиков при бактериальной пневмонии или бактериальном обострении хронического бронхита и бронхиальной астмы, либо бронходилятаторов или антиастматического лечения при вирусных инфекциях дыхательного тракта. При этом следует учитывать, что показатели СРБ при бактериальных инфекциях увеличиваются быстрее и выглядят значительнее, чем при вирусных, и остаются на повышенном уровне больше недели в случае, если антибактериальная терапия не применялась [8].
Таким образом, диагностическая система “НикоКард — СРБ” позволяет быстро (в течение 2-3 мин) и точно (количественно с помощью “НикоКард — Ридер”) оценить наличие воспаления и степень его выраженности, отличить бактериальные инфекции от вирусных, выбрать адекватное лечение воспаления (антибиотики, стероиды, противовоспалительные средства) и контролировать сам процесс лечения. Тест-система показывает хорошую корреляцию с такими широко распространенными лабораторными методами исследования, как турбидиметрия, нефелометрия и иммуноферментный анализ [9], но значительно превосходит их по эргоемкости, т. е. простоте, экономичности и эффективности.
| Лабораторная диагностика, приближенная к больному и понятная врачу — будущее практического здравоохранения. Тест “Никокард CRP” способен заменить легендарное СОЭ. Эта технология позволяет сэкономить средства и получить клинически значимые результаты |
II. Тест-система “НикоКард — Д-димер”. Д-димер — один из конечных растворимых продуктов расщепления фибрина [4]. Повышенные уровни Д-димера в плазме свидетельствуют о чрезмерных количествах образовавшегося в сосудистой системе фибрина.
При возникновении фибринового сгустка активизируются также фибринолитические процессы, которые начинаются с превращения плазминогена в плазмин в присутствии тканевого активатора плазминогена (тАП) и ионов кальция (см. рис.).
Плазмин расщепляет полимеризированный фибрин, при этом соседние Д-домены ковалентно перекрестно сшиваются с образованием Д-димера, имеющего специфичные неоантигенные детерминанты [7].
Повышающиеся концентрации в плазме Д-димера указывают на продолжающийся фибринолитический процесс и являются ключевым показателем тромботического состояния при тромбозе глубоких вен, легочной тромбоэмболии, артериальной тромбоэмболии и диссеминированном внутрисосудистом свертывании. Определять Д-димер следует также при ранней диагностике фибринолитических процессов (претромботический риск), в мониторинге при тромболитической терапии, при беременности (послеродовой период), злокачественных новообразованиях и хирургических вмешательствах.
Тест-система “НикоКард — Д-димер” аналогична системе “НикоКард — СРБ” и построена на том же иммунометрическом и иммунофильтрационном принципе с использованием моноклональных антител, конъюгированных с золотом в качестве индикатора. Антитела не дают перекрестных реакций с фибриногеном и другими продуктами деградации фибрина.
Ход определения Д-димера в техническом плане принципиально не отличается от тестов по системе “НикоКард — СРБ”. Необходимо всего 50 мкл цитратной плазмы, свободной от тромбоцитов, которая вносится в одно из отверстий пористой мембраны с моноклональными антителами против Д-димера.
Пурпурно-розовое окрашивание полуколичественно оценивается визуально, а количественно регистрируется портативным денситометром “НикоКард — Ридер” в диапазоне 0,25 — 10 мг/л. Время определения 2-3 мин. Нормальные значения ниже 0,5 мг/л.
Очевидно, что тест-система “НикоКард — Д-димер” объединяет в себе скорость и простоту латексных методов определения Д-димера с аналитическим качеством и чувствительностью иммуноферментных методов [4].
III. Тест-система “НикоКард — HbA1C”. Количество гликозилированного гемоглобина (HbA1C) в крови — важный показатель долговременного контроля за течением диабета и эффективностью его лечения.
|
Известно, что белки, в том числе гемоглобин, при длительном выдерживании в растворе, содержащем глюкозу, необратимо присоединяют ее остатки за счет химических (неэнзиматических) процессов [2].
Чем выше концентрация глюкозы в растворе и чем продолжительнее инкубация, тем больший процент молекул гемоглобина гликозилируется. Поэтому HbA1C характеризует средний уровень концентрации глюкозы в крови за время полужизни молекулы гемоглобина (3-4 мес.).
Лечение диабета проводится лекарствами, понижающими содержание глюкозы в крови лишь на ограниченный промежуток времени, и очень важно подобрать схему лечения со стойкой нормализацией гликемии.
Исследование HbA1C оказывается ценным лабораторным показателем, характеризующим некоторый средний уровень глюкозы на протяжении длительного промежутка времени. Количество HbA1C выражается в молярных процентах (количество остатков моносахарида на 100 молекул гемоглобина).
Для определения HbA1C разработано много способов, включающих различные виды хроматографии, электрофорез и колориметрические методы [3]. Наиболее точные из них хроматографические, но они трудоемки и требуют специальной аппаратуры и реактивов.
Тест-система “НикоКард — HbA1C” лишена этих недостатков и позволяет быстро, точно и воспроизводимо измерять уровень HbA1C в крови в присутствии пациента. Метод основан на специфическом химическом связывании искуственно синтезированного зонда (борная кислота, коньюгированная с синим красителем) с HbA1C после лизиса эритроцитов и преципитации гемоглобина ZnCl2.
Эти процессы идут одновременно в течение 2 мин при добавлении 3,5 мкл цельной крови к 200 мкл специального реагента при перемешивании. 25 мкл смеси наносят на пористый фильтр, как и в двух описанных выше тест-системах. Излишки реагентов удаляют каплей промывающего раствора.
Преципитат анализируют с помощью денситометра “НикоКард — Ридер”, измеряя интенсивность синего (гликозилированный гемоглобин, 620 нм) и красного (общий гемоглобин, 460 нм) окрашивания соответственно. Отношение 620:460 нм пропорционально проценту HbA1C в образце и вычисляется автоматически. Нормальные значения в крови — 4,5-6% HbA1C.
Тест-система работает в диапазоне 4-18% HbA1C, не интерферирует с другими компонентами сыворотки, показывает хорошую воспроизводимость и корреляцию с HPLC [6].
Литература
1. Калинин Н. Л., Корнев А. В., Рыбкин Ю. Б. и сотр. // Клин. лабор. диагн. 1996. № 2. С. 35-38. 2. Лабораторные методы исследования в клинике // Под ред. В. В. Меньшикова. М., 1987. 3. Энциклопедия клинических лабораторных тестов // Под ред. Н. У. Тица и В. В. Меньшикова. М., 1997. 4. Dale S., Gogstad G. O., Brosstad F. et al. // Thromb. and Haemostasis. 1994. Vol. 71, № 3. P. 270-274. 5. Fassbender R., Pargger H., Muller W., Zimmerli W. // Crit. Care Med. 1993. Vol. 41, № 5. P. 471-476. 6. Frantzen F., Lovli T., Faaren A. L. et al. // Axis Biochemicals AS, Oslo, Norway, R&D Section, Nycomed Pharma AS, Oslo, Norway, 1998. 7. Gogstad G. O., Dale S., Brosstad F. et al. // Clin. Chem. 1993. Vol. 39, № 10. P. 2070-2076. 8. Melbye H., Berdal B. H., Straume B. et al. // Scand. J. Infect. Dis. 1992. № 24. P. 647-655. 9. Urdal P., Borch S. M., Landaas S. et al. // Clin. Chem. 1992. Vol. 38, № 4. P. 580-584.
Загрузка...
