Врачи рассказывают про эдта

ПРАКТИКА

Генетический тест – сложное, многостадийное и высокотехнологическое исследование. Разбираемся во всех тонкостях этого процесса и объясняем из чего складывается его стоимость.

Проведение генетического теста включает несколько этапов, которые требуют специализированного оборудования стоимостью несколько миллионов долларов и участия нескольких специалистов. Основной вклад в цену исследования вносят реагенты и расходные материалы, которые мы закупаем в основном в США. Кроме этого, существенной статьей расходов лаборатории являются контрольные процедуры – использование внутренних и внешних контрольных образцов, аудиты независимых экспертов и технических специалистов по обслуживанию оборудования.

8 этапов проведения генетического теста:

Этап 1. Сдача биоматериала

В качестве исходного биоматериала к нам в лабораторию чаще всего поступает кровь или слюна. Для генетического анализа оба биоматериала подходят одинаково – и там, и там достаточно много ДНК, ее просто извлекать. Большинство наших клиентов сдает именно слюну – это можно сделать где угодно, да еще и без боли.

Однако медицинские клиники, которые предлагают наши тесты своим пациентам, зачастую предпочитают собирать кровь, потому что так проще им с точки зрения маршрутизации их исследований. Слюна собирается в специальный комплект, которые содержит консервант, позволяющий сохранять ДНК до года при комнатной температуре.

Кровь собирается из пальца или из вены в специальные пробирки с консервантом ЭДТА. Этот консервант не дает крови свернуться, но не защищает ДНК от разрушения, поэтому кровь необходимо доставлять к нам в лабораторию в течение пары дней после сдачи.

В крови и слюне кроме ДНК содержится много других химических соединений – белков, жиров, полисахаридов, неорганических веществ. Все они могут помешать дальнейшему проведению анализа, поэтому ДНК необходимо очистить. Принцип очистки ДНК заключается в том, что после разрушения всех клеточных структур в образце ДНК сорбируют на специальные мембраны, которые затем промывают очищающими растворами. После промывок ДНК снимают с мембран в специальный буфер, в котором ДНК и хранится для последнующего анализа.

Схема выделения ДНК из биоматериала

Для этого этапа мы используем специальный робот для выделения ДНК. Вот как выглядит его работа (сильно ускоренно):

Работа робота по выделению ДНК

Этап 3. Контроль качества выделенной ДНК

ДНК для генетического исследования должна быть высокого качества – без примесей других соединений и следов деградации. Поэтому после выделения ДНК проверяется несколькими способами, чтобы оценить ее количество и качество.

Около 5% образцов не проходят контроль качества – в этом случае мы просим клиентов повторно сдать образец.

Чаще всего непрохождение контроля качества связано с деградацией ДНК из-за несоблюдения правил при сборе (например, человек поел сразу перед сдачей или доставка крови в лабораторию заняла больше 7 дней).

Этап 4. Амплификация и фрагментация ДНК

Некоторые наши генетические исследования проводятся с помощью микрочипов, которые позволяют проанализировать более 600 тыс. генетических вариантов. Для того, чтобы начать такой анализ, необходимо амплифицировать образец – то есть увеличить количество ДНК в образце в несколько раз путем копирования.

Это делается с помощью специальных ферментов – полимераз, которые выделены из бактериальных клеток. После амплификации ДНК представляет собой длинные молекулы, которые с относительно низкой эффективностью будут в последующем участвовать в необходимых процессах.

Поэтому после амплификации ДНК разрезают на короткие фрагменты с помощью ферментов.

Этап 5. Гибридизация ДНК с микрочипом

На чипе можно разглядеть 24 прямоугольника – по одному на каждый образец, который мы можем проанализировать на таком чипе. А каждый прямоугольник состоит из нескольких миллионов сфер, на которые нанесены синтетические фрагменты ДНК (поэтому чипы называются beadchips).

Микрочип, который применяется для генетических исследований

Синтетические фрагменты ДНК на чипе произведены таким образом, чтобы отделять из смеси фрагментов генома человека только те учатки, которые содержат необходимые для исследования генетические варианты. Поэтому в ходе анализа на чипе мы всегда анализируем одни и те же 600 тыс. участков генома, которые отвечают за заболевания, предрасположенности, происхождение и многое другое. Чтобы чип смог отделить необходимые фрагменты, мы проводим гибридизацию. Это процесс, при котором синтетические молекулы на чипе «ищут» при определенной температуре похожие на них фрагменты в образце от нашего клиента.

Этап 6. Сканирование микрочипа

После завершения гибридизации, мы промываем чип несколькими растворами при разных температурах, в результате чего «прилипшие» к чипу фрагменты ДНК начинают светиться. В зависимости от цвета этого свечения мы можем узнать, какой именно нуклеотид находится в определенной позиции в геноме человека.

Однако разглядеть это свечение глазом невозможно – для этого применяется специальный сканер, который работает как флуоресцентный микроском очень высокого разрешения – светит на чип высокомощными лазерами и фотографирует поверхность.

Фотография участка микрочипа в сканере

Для сканирования мы используем Illumina HiScan – самый производительный сканер микрочипов, единственный в России.

Сканер микрочипов Illumina HiScan

Этап 7. Обработка изображений, контроль качества и определение первичной последовательности ДНК

Полученные изображения чипа обрабатываются нашими биоинформатиками так, чтобы извлечь информацию о последовательности ДНК конкретного клиента.

На этом этапе также проводится и контроль качества данных – по специальным внутренним контрольным точкам мы оцениваем качество проведенного анализа перед началом интерпретации.

Первичные данные биоинформатики записывают в файл в формате vcf, его каждый наш клиент может скачать в своем личном кабинете и передать другим биоинформатикам во всем мире – vcf – это стандарт записи генетической информации о человеке.

Этап 8. Интерпретация результатов

Пример результата генетического теста

В зависимости от заказанного исследования, обнаруженные генетические варианты интерпретируются биостатистиками и врачами-генетиками для выявления рисков заболеваний, определения склонностей и предрасположенностей или для исследования происхождения человека. Результаты генетического теста отображаются нашим клиентам в личном кабинете на сайте Genotek.

Посмотреть пример результатов генетического теста

Приходите к нам в лабораторию – тут вы сможете вживую увидеть процесс проведения анализа и приборы, на которых мы осуществляем разные этапы.

Какую информацию о человеке дают ДНК-тесты?

Подпишитесь на нашу рассылку, и мы все подробно расскажем. Это бесплатно.

Пробирки с фиолетовой крышкой

      Этилендиаминтетраацетат (ЭДТА) является предпочтительным антикоагулянтом для гематологических исследований. ЭДТА и его щелочные соли способны создавать хелатные соединения с ионами кальция с образованием растворимых высокостабильных комплексов. Наиболее эффективная концентрация ЭДТА – 1,2 мг/мл крови. Во всем мире используют три варианта солей ЭДТА: ЭДТА-К3, ЭДТА-К2 и ЭДТА-Na2. Наиболее предпочтительной и рекомендуемой Международной Комиссией по Стандартизации в Гематологии является двукалиевая соль ЭДТА:

     ЭДТА-К3 показывает меньшую способность поддержания крови в жидком состоянии, также ЭДТА-К3 влияет на подсчет лейкоцитов, занижая их количество.  различия между ЭДТА-К2 и ЭДТА-Na2 в клиническом плане незначительны и ими можно пренебречь, но ЭДТА-Na2 хуже растворим.

     Для получения качественного результата анализа необходимо: немедленно после взятия крови осторожно перевернуть пробирку 5-7 раз для лучшего перемешивания крови и антикоагулянта; 

плазма отделяется после центрифугирования. Нормальные скорости центрифугирования – 1000-1500G (2000-3000 об/мин). При необходимости допускается центрифугирование с ускорением 4000G c крышечкой и до 12000G без крышечки.

    Наиболее широко используются пробирки, содержащие 1,95 мг ЭДТА/1мл крови. Они нашли свое применение в таких областях лабораторной практики, как: гематологические исследования – подсчет клеток крови, определение СОЭ и пр. 

ПЦР-исследования (качественные и количественные методики).

    Пробирки с образцами крови можно хранить до 6-10 часов при 4ºС, хранение свыше 24 часов не рекомендуется из-за снижения числа эритроцитов и лейкоцитов.

     Каждая пробирка содержит специальные добавки (Без капилляра: Pro-coagulation, Clot Activator /Separation Gel, EDTA K2, EDTA K3, Lithium Heparin, Sodium Heparin, NaF/EDTA K2; С капилляром:  Pro-coagulation, Clot Activator /Separation Gel, EDTA K2, EDTA K3, Lithium Heparin, Sodium Heparin, NaF/EDTA K2.) позволяющие осуществлять самые разнообразные виды исследований.

     Пробирки для капиллярной крови выпускаются двух типов: без капилляра и с капилляром.

     Собранная для анализа кровь будет находиться в полной сохранности, ведь крышка, которая очень легко и прочно закрывается, минимизирует аэрозольный эффект. Если Вы используете пробирки с капиллярами, это станет гарантией того, что капиллярная кровь не свернется во время взятия.

• УЗИ диагностика
• Врачебный приём
• Правила оказания медицинских услуг

Интервью с химиком о фактах и мифах в свойствах защитных кремов — Гетсиз.ру

Назначение защитных кремов – создание надежного барьера между промышленными загрязнениями и кожей. Слой должен быть не только стойким, но и воздухопроницаемым, чтобы естественный влагообмен и воздухообмен кожи не нарушались.

Современные технологии и рост культуры защиты привели к появлению гидрофильных и гидрофобных кремов с дополнительными свойствами. Многие из них теперь питают кожу, препятствуют появлению свободных радикалов, увлажняют и не только.

Александр Пушков, кандидат биологических наук, заведующий отдела ЦКП ФГБУ «Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов Национального исследовательского центра «Курчатовский институт» ответил на вопросы Гетсиз.ру и рассказал, действительно ли средства защиты кожи могут связывать соли тяжелых металлов и способен ли крем с УФ-фильтрами защитить от креозота.

Александр Алексеевич, производитель вводит в формулу средств защиты кожи тетранатрий ЭДТА для связывания ионов тяжелых металлов. Поясните, пожалуйста, каковы основные свойства тетранатрий ЭДТА?

Это натриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты, растворимая в воде. Она была разработана для смягчения воздействия жесткой воды, потому что легко вступает в реакции обмена, извлекая ионы металлов из воды и нерастворимых солей.

Сейчас применяется в промышленности для промывки теплоэнергетического оборудования, труб, котлов с целью удаления отложений, в косметике – для консервации и смягчения воды.

Натриевые соли ЭДТА также используются в качестве хелирующего агента – связывания ионов тяжелых металлов.

Вы упомянули способность связывать ионы тяжелых металлов. Есть ли специфические требования, при каких условиях проявляются хелирующие свойства?

Реакции должны проходить в жидкой среде. Если речь идет о тетранатрий ЭДТА, оптимальный рН для связывания ионов тяжелых металлов составляет около 10-12, то есть реакции проходят в сильнощелочной среде, соответствующей рН мыла. Это важно, потому что идеальный рН кожи, к которому должен стремиться и рН крема – 5,5.

Щелочная среда раздражает кожу. В промышленности для ускорения реакций хелирования с использованием тетранатрий ЭДТА температуру воды поднимают. Так, при очистке трубопроводов 5-10% раствор тетранатрий ЭДТА заливают в систему водоснабжения и на протяжении полутора-двух часов перекачивают по ней.

Температура обработки при этом составляет 70-80 градусов.

В медицине динатрий ЭДТА, еще одна натриевая соль ЭДТА, используется при патологиях, связанных с избытком в организме солей кальция. При этом препарат вводится внутривенно в течение недели.

Таким образом, в каждой сфере для получения хелирующего результата используется конкретная технология, концентрация, длительность.

Эти требования справедливы и в отношении косметических продуктов.

Если производитель вводит тетранатрий ЭДТА в косметический продукт для связывания ионов тяжелых металлов, он должен провести исследования и собрать доказательную базу: какова была доля солей ЭДТА в составе, ионы каких металлов участвовали в эксперименте, в какой концентрации, при каких условиях.

Получить положительные результаты. После этого можно утверждать о хелирующих свойствах. Если таких исследований не проводилось, то заявление – не более, чем маркетинговых ход, а соли ЭДТА будут работать в составе как консерванты и смягчители воды.

Вы упоминали тетранатрий ЭДТА и динатрий ЭДТА. В чем разница?

Основное различие между динатрий ЭДТА и тетранатрий ЭДТА кроме разного количества ионов натрия в формуле в том, что динатрий ЭДТА имеет кислый рН, а тетранатрий ЭДТА щелочной. Динатрий ЭДТА можно найти во многих продуктах, которые мы используем в повседневной жизни: шампунь, краски для волос, лосьон, гель для душа.

Он добавляется в косметику, чтобы увеличить срок годности продукта и улучшить пенообразующие свойства. Связывая ионы металлов и дезактивируя их, соль смягчает жесткую воду. Таким образом вода не пересушивает кожу, а ионы металлов не оседают на коже или волосах.

Это соединение также используется в пищевой промышленности как консервант.

Ну, и в заключение про соли ЭДТА. Насколько они вообще безопасны для кожи?

Основываясь на научных данных, собранных американской национальной торговой ассоциацией «Совет по продуктам личной гигиены», использование динатрия ЭДТА в косметике и средствах личной гигиены было признано безопасным.

Та же ассоциация отмечает, что опасность может быть скрыта в компонентах, которые присутствуют в продукте наравне с самой солью ЭДТА.

Хотя клинические исследования не выявили, что динатрий ЭДТА проникает в кожу, они же показали, что компонент усиливает проникновение в кожу других веществ.

Поэтому должны быть тщательно проанализированы остальные ингредиенты, которые признаются безопасными только когда он абсорбируются кожей. Если ингредиенты обладают изначально аллергенным и токсичным потенциалом, то их раздражающее действие на кожу может быть усилено.

Фактор опасности тетранатрий ЭДТА выше. В зависимости от сферы применения уровень опасности колеблется от низкого до среднего. Эта соль может быть токсичной для кожи и вызывать раздражение. Тетранатрий ЭДТА также вреден для окружающей среды. Он относится к экотоксинам.

Александр Алексеевич, следующие вопросы касаются фототоксичных веществ – креозота, пека и каменноугольных смол. Поскольку они усиливают чувствительность кожи к солнцу, что приводит к сильным ожогам и светобоязни, возможна ли защита от таких соединений с помощью солнцезащитных кремов?

Дело в том, что креозот и ему подобные вещества не только многократно повышают чувствительность кожи к ультрафиолету, провоцируя сильные ожоги от солнца. В первую очередь они токсичны сами по себе. Креозот считается ядовитым веществом, потенциальным канцерогеном, то есть может спровоцировать рак кожи.

Крем может защитить при условии, что формула работает на создание прочного механического барьера, физически защищая кожу от проникновения фототоксинов. То есть демонстрирует выраженные гидрофильные свойства. Поэтому кремы только лишь с УФ-фильтрами я бы рассматривал как неполную и неполноценную защиту.

Помимо этого, УФ-фильтры ослабляют действие УФ-излучения, но не исключают полностью. Для того, чтобы УФ-защита была достаточной, на коже должен быть нанесен толстый защитный слой, не менее чайной ложки на каждую руку, ногу, спину, переднюю часть туловища – иначе эффект будет низким. А люди чаще всего наносят крем тонким слоем.

Это снижает степень защиты вполовину.

То есть, если будут соблюдены условия – наличие выраженных гидрофильных свойств, комплекс УФ-фильтров, толстый защитный слой – крем может стать барьером для фототоксичных веществ?

Номинально, да. При условии, что производитель провел испытания и получил доказательства, что крем действительно защищает от фототоксичных веществ. Потому что эффективно защитить от креозота может далеко не каждый гидрофильный крем – агрессивный химикат обладает высокой степенью проницаемости.

Но даже специализированный крем с высокой степенью защиты закроет лишь часть проблем. При работе с креозотом и ему подобными канцерогенами дело не ограничивается вредом для кожи. Пары креозота раздражают слизистые: глаза, легкие, рот и нос. А они намного более чувствительны и легко проницаемы в отличие от кожи.

Поэтому решение по защите от фототоксинов с помощью крема выглядит половинчатым. Эффективным вложением денег в защиту рабочих станет приобретение СИЗ, которые исключат попадание креозота на кожу и слизистые: плотные перчатки, защитные плащи, СИЗ органов дыхания и глаз.

Тогда крем может стать дополнительным элементом защитной системы. Например, его можно наносить на лоб и щеки, не защищенные очками и респиратором. Защититься от креозота с помощью одного лишь крема невозможно. Это, как накладывать гипс лишь на часть перелома, такое же бессмысленное действие.

Все равно перелом не срастется – а в случае с креозотом все равно яд попадет в организм.

(6

Наполнители для вакуумных пробирок: какие бывают и как работают — Проба

Сыворотка крови – жидкая часть крови лишенная форменных элементов и некоторых белков (фибрин и др.) в отличие от плазмы, в которой сохраняются все элементы жидкой части крови кроме форменных элементов.

Получение сыворотки крови является результатом двухступенчатого биохимического процесса: свертывания (коагуляции) крови и ретракции (уплотнения) сгустка.

Для запуска коагуляционного каскада необходимо наличие внешнего активатора, каковым может служить диоксид кремния, поэтому процесс свертывания крови быстрее происходит в стеклянных пробирках, так как кремния диоксид является базовым материалом стекла или в пластиковых пробирках с активатором свертывания. Активатор свертывания (clot activator) выполнен в виде напыления на внутренней стенке пробирки.

После образования сгустка начинается этап его уплотнения и выделения сыворотки. На практике ретракция сгустка ускоряется центрифугированием пробирок с кровью.

Для получения максимально чистой сыворотки рекомендуется соблюдение трёх условий:

1. После забора крови в пробирку в соответствии с инструкцией необходимо осторожно однократно перевернуть пробирку для более полного контакта крови с активатором свертывания;
2. Дождаться завершения процесса свертывания крови в течение 20-30 минут при комнатной температуре и вертикальном положении пробирки;
3. Центрифугировать пробирку со свернувшейся кровью не менее 10 минут с ускорением 1500 G (примерно 3000 об/мин) для максимального выдавливания сыворотки из сгустка. При необходимости допускается центрифугирование с ускорением 4000G c крышечкой и до 12000G без крышечки.

После центрифугирования и полной ретракции сгустка сыворотка располагается над сгустком, но в контакте с ним. Сохраняется опасность загрязнения сыворотки составляющими сгустка при неосторожном обращении с пробиркой (встряхивание, опрокидывание и пр.).

Для лучшего очищения сыворотки и более полного разграничения сыворотки и сгустка применяются специальные пробирки, содержащие биологически инертный олефиновый гель.

Последний представляет собой тиксотропный кополимер, который тяжелее сыворотки, но легче кровяного сгустка, поэтому после центрифугирования гель в виде тонкой полоски занимает промежуточное положение и служит разделительным барьером. Стабильность такого барьера гарантирована в течение 5-7 дней при хранении пробирки с кровью при комнатной температуре.

Оптимальные сроки сохранности образца крови в данных пробирках составляет при комнатной температуре 6 часов, при хранении в холодильнике (+4ºС) – 24 часа. Повторное центрифугирование пробирок, особенно с гелем, не допускается.

Полученная сыворотка крови применяется для очень широкого спектра лабораторных биохимических, ИФА и иммунологических исследований:

• белковый состав,
• ферменты,
• гормоны,
• онкомаркеры,
• ВИЧ-инфицирование, гепатиты и пр.

Антикоагулянты для получения цельной крови или плазмы

Не все анализы в клинике делаются из сыворотки крови. Для многих видов исследований необходима цельная кровь, содержащая форменные элементы, или плазма, освобожденная от клеток крови центрифугированием.

Для получения несвернувшейся крови разработаны пробирки с определенными добавками — антикоагулянтами. На практике используют два вида антикоагулянтов:

1. Ингибиторы (вещества, вызывающие торможение) тромбина. Тромбин играет ключевую роль в коагуляционном каскаде. Он принимает участие в формировании факторов свертывания крови и способствует трансформации фибриногена в фибрин. Добавление биохимических ингибиторов тромбина эффективно активирует антикоагуляционные свойства крови.
2. Связывание (удаление) ионов Ca2+. При прочих равных условиях свертывание крови происходит при активном участии ионов Ca2+. Удаление их является эффективным механизмом сохранения крови в жидком состоянии.

Гепарин 

Гепарин — кислый мукополисахарид с молекулярной массой 4 000–40 000 – является натуральным антикоагулянтом, присутствующем в любом здоровом организме. Гепарин активирует создание комплексных соединений между антитромбином III и такими факторами свертывания крови, как тромбин, факторы XIIa, XIa, Xa, IXa и VIIa. В таком комплексе факторы свертывания необратимо деактивируются.

Для целей получения плазмы крови в пробирки добавляют литиевую либо натриевую соль гепарина в пропорции к забираемой в пробирку кровью 15-20 МЕ/1 мл, что служит гарантией полной инактивации свертывания крови и не искажает исследуемые параметры. Эритроциты сохраняются в образце крови до 8 часов. Нельзя использовать для проведения анализов образец крови, хранившийся более 48 часов даже в условиях холодильника (+4ºС).

Для получения качественного анализа необходимо немедленно после взятия крови осторожно перевернуть пробирку 5-7 раз для лучшего перемешивания крови и гепарина.

Плазма отделяется после центрифугирования. Нормальные скорости центрифугирования – 1 000–1 500 G (2 000–3 000 оборотов/минуту).

При необходимости допускается центрифугирование с ускорением 4 000 G c крышечкой и до 12 000 G без крышечки.

В клинике пробирки с гепарином применяются, в основном для проведения исследования электролитного состава крови, газового состава крови и содержания алкоголя в крови.

Не рекомендуется использовать гепарин для:

• морфологических исследований, так как кислотный характер гепарина способствует обесцвечиванию мазка крови, придавая ему голубоватый оттенок;
• подсчета лейкоцитов и тромбоцитов, поскольку гепарин стимулирует агрегацию этих клеток крови;
• исследований по методике полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Для более чистого разграничения плазмы крови и сгустка применяются специальные пробирки, содержащие кроме гепарина инертный олефиновый гель. Последний представляет собой тиксотропный кополимер, который тяжелее плазмы, но легче форменных клеток крови, поэтому после центрифугирования гель в виде тонкой полоски занимает промежуточное положение и служит разделительным барьером.

Фторид натрия/ЭДТА калия (серая крышка пробирки)

Добавление фторида натрия и ЭДТА калия в пробирку позволяет предотвратить разрушение глюкозы крови (процесс, называемый гликолизом) и сохранить ее уровень во взятом образце крови.

Фторид натрия и оксалат калия выступают в качестве антикоагулянтов, связывая ионы Са2+ и, кроме того, фторид натрия стабилизирует уровень глюкозы.

Глюкоза разрушается до пирувата и лактата при последовательном осуществлении различных энзиматических реакций. Фторид натрия ингибирует некоторые ферментативные реакции, включая превращение фосфоглицерата в фосфоенолпируватацид, и предотвращает гликолиз.

Для получения качественного результата анализа необходимо немедленно после взятия крови осторожно перевернуть пробирку 5-7 раз для лучшего перемешивания крови и антикоагулянта.

Плазма отделяется после центрифугирования. Нормальные скорости центрифугирования — 1 000–1 500G (2 000–3 000 оборотов/минуту).

Пробирки с добавлением фторида натрия и оксалата калия используют для проведения определения уровня сахара (глюкозы) в крови. Соотношение компонентов 1/1, общее количество добавляемых реагентов – 4,5 мг/1 мл забираемой в пробирку крови.

Важное про фторид натрия и ЭДТА калия:

• Фторид блокирует активность уреазы и некоторых других ферментов.
• Образцы крови из данных пробирок нельзя использовать для прямого определения энзимов.
• Фторид натрия и ЭДТА калия связывают ион Са2+, заменяя в крови 1 ион кальция на 2 иона натрия или калия.
• Следствием этого является повышение напряжения ионов в межклеточной жидкости и выкачивание воды из внутриклеточного пространства в межклеточное, сморщивание клеток крови с умеренным “выдавливанием” из эритроцитов гемоглобина. Поэтому видимый гемолиз свойственен образцам крови с данной добавкой.
• Глюкоза превращается в лактат в результате комплекса реакций, включающего в себя различные этапы. Фторид ингибирует один их последних этапов разрушения глюкозы, начальные этапы с участием гексокиназы и фосфофруктокиназы блокируются менее эффективно, поэтому можно наблюдать снижение содержания глюкозы в образце крови на 6-7% от первоначального.
• После первоначального незначительного снижения уровня глюкозы ее количество остается постоянным при хранении крови в пробирке в течение 8-10 часов при температуре до 25ºС и в течение 2-3 дней в холодильнике (+4ºС).

ЭДТА-К2 (сиреневая крышка)

Этилендиаминтетраацетат (ЭДТА) является предпочтительным антикоагулянтом для гематологических исследований. ЭДТА и его щелочные соли способны создавать хелатные соединения с ионами кальция с образованием растворимых высокостабильных комплексов.

Наиболее эффективная концентрация ЭДТА – 1,2 мг/мл крови. Во всем мире используют три варианта солей ЭДТА: ЭДТА-К3, ЭДТА-К2 и ЭДТА-Na2.

Наиболее предпочтительной и рекомендуемой Международной Комиссией по Стандартизации в Гематологии является двукалиевая соль ЭДТА:

ЭДТА-К3 показывает меньшую способность поддержания крови в жидком состоянии, также ЭДТА-К3 влияет на подсчет лейкоцитов, занижая их количество.

Различия между ЭДТА-К2 и ЭДТА-Na2 в клиническом плане незначительны и ими можно пренебречь, но ЭДТА-Na2 хуже растворим.

Для получения качественного результата анализа необходимо немедленно после взятия крови осторожно перевернуть пробирку 5-7 раз для лучшего перемешивания крови и антикоагулянта.

Плазма отделяется после центрифугирования. Нормальные скорости центрифугирования — 1 000-1 500 G (2 000–3 000 оборотов/минуту).

При необходимости допускается центрифугирование с ускорением 4 000 G c крышечкой и до 12 000 G без крышечки.

Наиболее широко используются пробирки, содержащие 1,95 мг ЭДТА/1мл крови. Они нашли свое применение в таких областях лабораторной практики, как:

• гематологические исследования – подсчет клеток крови, определение СОЭ и пр. ;
• ПЦР-исследования (качественные и количественные методики).

Пробирки с образцами крови можно хранить до 6-10 часов при 4ºС, хранение свыше 24 часов не рекомендуется из-за снижения числа эритроцитов и лейкоцитов.

Цитрат натрия (голубая крышка)

Цитрат натрия является антикоагулянтом для сбора венозной крови с це6лью проведения исследований коагуляционных свойств крови.

Процесс свертывания крови представляет собой последовательность сложных реакций, в которых результатом первых реакций (с участием активных ферментов) является активация следующих, первоначально неактивных энзимов.

Последним активным ферментом в этой цепочке присутствует тромбин, который осуществляет превращение фибриногена в фибрин. Нити фибрина опутывают клетки крови и окончательно формируют кровяной сгусток. Крайне важную роль на этом этапе играют ионы Са2+.

Антикоагуляционные свойства цитрата проявляются в формировании комплекса с ионами Са2+ и эффективном удалении их из крови.

Общее исследование свертывания крови определяется временем, необходимым для последовательной активации ферментов, участвующих в коагуляционном процессе. Проводится определение времени активации и количественное измерение различных составляющих коагуляционного каскада, для чего создаются так называемые “обходные пути” добавлением некоторых промежуточных продуктов свертывания.

Наиболее часто используются пробирки с 3,8% или 3,2% раствором цитрата натрия (0,129 моль/л), соотношение цитрата к количеству забираемой крови 1/9.

Для максимально качественного проведения коагулологических исследований рекомендуется соблюдение определенных правил:

• нельзя использовать пробирку для взятия крови на коагуляционные тесты первой, сразу после венепункции, так как на результаты может повлиять выделяющийся при пункции тканевой тромбопластин;
• венозный жгут во время взятия крови в пробирку должен быть снят;
• немедленно после взятия крови пробирку аккуратно переворачивают 5-6 раз для лучшего перемешивания крови и антикоагулянта;
• сразу после этого надо проверить количество взятой крови: ее верхняя граница должна быть на уровне голубой полоски на этикетке.

Оптимальными условиями хранения пробирки с образцом крови является температура 20-24ºС и исследование коагуляционных свойств и факторов свертывания крови должно быть проведено в течение 2-х часов с момента взятия крови.

С чем связаны тромботические осложнения аденовирусных вакцин? | новости | «лечащий врач» – профессиональное медицинское издание для врачей. научные статьи

Коллектив ученых из Германии представил результаты исследования механизма возникновения редкого, но опасного осложнения вакцины от AstraZeneca, связанного с образованием тромбов. Работа еще не прошла рецензирование.

Европейские регуляторы сообщали о более чем 220 случаях необычного тромбоза и тромбоцитопении у пациентов, получавших вакцину под названием Vaxzevria (новое название вакцины от AstraZeneca). 

Это первое крупное исследование, посвященное этой проблеме – ученые проводили анализ уровня антител к белку тромбоцитарного фактора 4. Один и тот же механизм образования тромбов был подтвержден тремя различными методами исследования: динамическим рассеянием света, микроскопией сверхвысокого разрешения и электронной микроскопией.

Авторы работы заявляют, что полученные данные являются серьезным подтверждающим доказательством первоначальной гипотезы.

Ее основное положение состояло в том, что это осложнение является характерным для целого класса вакцин, которые используют аденовирус в качестве вектора.

Хотя к вакцинам с этим механизмом действия относится не только Vaxzevria, но и, например, Спутник V, авторы отмечают, что конкретные результаты исследования были получены только на основании анализа вакцины AstraZeneca.

В работе описывается двухэтапный каскад событий. На первом этапе аденовирусная оболочка вакцины контактирует с тромбоцитами кровеносного русла. Эти клеточные элементы отвечают не только за остановку кровотечения, но и играют определенную роль в иммунном ответе. При активации они изменяют свою форму и высвобождают химические сигналы.

При массовой активации тромбоцитов, что происходит на фоне приема некоторых антикоагулянтов (например, гепарина) или в редких случаях после использования вакцины Vaxzevria, таких сигналов высвобождается значительно больше. Это приводит к дальнейшей активакции иммунного ответа и B-клеток.

Они начинают активно продуцировать антитела против тромбоцитарного фактора 4, который «координирует» процессы свертвания крови.

Второй этап каскада связан с этилендиаминтетрауксусной кислотой (ЭДТА, EDTA), которая содержится в вакцине в качестве стабилизирующего компонента (данный компонент представлен не во всех аденовирусных вакцинах – например, он отсутствует в вакцине от Johnson & Johnson, однако присутствует в «Спутнике»). Данное соединение расширяет связи между клетками, формирующими сосудистую стенку, и усиливает проницаемость сосудов. Это позволяет крупным белково-тромбоцитарными комплексам перемещаться по кровотоку и – в редких случаях – системно распространяться.

Один из авторов работы указывает на то, что в теории увеличить безопасность вакцины можно путем устранения из ее состава молекул ЭДТА как триггера второго этапа иммунного каскада. Однако достоверно ответить, насколько весомый вклад в работу вакцины вносит это соединение, могут только разработчики вакцины.

В противовес этому предположению можно привести аргумент, что применение вакцины Johnson & Johnson в ряде случаев также приводит к формированию тромбов. По-видимому, определенную роль в этом может играть размер молекулы – у других вакцин (например, мРНК-вакцин) комплексы белок-антитело имеют меньший размер.

Коллектив авторов скептически относится к данным о большей распространенности тромбоза среди женщин. В самом начале мероприятий по вакцинации прививались преимущественно медицинские работники, значимую часть которых составляют женщины. Также определенное значение может иметь гормональный фон и несколько большая предрасположенность женщин к аутоиммунным заболеваниям.

В настоящее время некоторые европейские страны приостановили или прекратили использование вакцины AstraZeneca. В заявлении Европейского медицинского агентства указывается, что предупреждение о риске развития тромбоза и тромбоцитопении должно быть добавлено к информации об этой вакцине.

Источник: https://www.researchsquare.com/article/rs-440461/v1

Наконец решили привиться? Ура! Вот инструкция, как подготовиться — и как сделать прививку, которая правда работает — Meduza

Данное сообщение (материал) создано и (или) распространено иностранным средством массовой информации, выполняющим функции иностранного агента, и (или) российским юридическим лицом, выполняющим функции иностранного агента.

???? ???? ???? ???? ???? Нам нужна ваша помощь. Пожалуйста, поддержите «Медузу»

Сейчас в России можно привиться тремя препаратами: «Спутником V» (он зарегистрирован под названием «Гам-Ковид-Вак»), «ЭпиВакКороной» и «КовиВаком». Список формальных противопоказаний у них схож.

В России пока прививают от ковида только с 18 лет (потому что пока нет достаточных данных об эффективности и безопасности этих вакцин у детей). Кроме возраста, есть и другие общие противопоказания:

• гиперчувствительность к какому-то компоненту вакцины;

«Спутник V» (он же «Гам-КОВИД-Вак»)

Первый компонент

• рекомбинантные аденовирусные частицы 26-го серотипа, содержащие ген белка S SARS-CoV-2
• трис (гидроксиметил)аминометан
• хлорид натрия
• сахароза
• полисорбат
• гексагидрат магния хлорида
• ЭДТА (этилендиаминтетраацетат натрия)
• этанол
• вода

Второй компонент

• рекомбинантные аденовирусные частицы 5-го серотипа, содержащие ген белка S SARS-CoV-2
• трис (гидроксиметил)аминометан
• хлорид натрия
• сахароза
• полисорбат
• гексагидрат магния хлорида
• ЭДТА (этилендиаминтетраацетат натрия)
• этанол
• вода

«ЭпиВакКорона»

• пептидные антигены белка S SARS-CoV-2
• гидроксид алюминия
• дигидрофосфат калия
• хлорид калия
• додекагидрат натрия гидрофосфата
• хлорид натрия
• вода

«КовиВак»

• антиген инактивированного SARS-CoV-2
• гидроксид алюминия
• фосфат дигидрат динатрия
• дигидрофосфат дигидрат натрия
• хлорид натрия
• вода

• любые (не только на прививку) тяжелые аллергические реакции в прошлом. Речь об анафилаксии, то есть быстрой аллергической реакции, которая может сопровождаться отеком, снижением артериального давления и остановкой дыхания;
• беременность и период грудного вскармливания.

Среди противопоказаний для введения «ЭпиВакКороны» есть еще , а также злокачественные заболевания крови и новообразования.

Но нужно отметить, что почти все эти противопоказания противоречат тому, что рекомендуют различные медицинские организации и базы знаний. Обычно среди противопоказаний там называют только тяжелую аллергическую реакцию на предыдущее введение этой вакцины или ее компонент.

Дело в том, что, по современным данным, после тяжелой аллергической реакции (пусть и на другую вакцину) можно безопасно прививаться. Для этого лучше понять, что именно вызвало такую реакцию организма.

В то же время в теории аллергия может развиться у любого человека почти на любое вещество, поэтому по российским правилам в местах, где проводят вакцинацию, должны быть легко доступны средства, которые применяются при анафилаксии. Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) также указывает лишь два противопоказания:

• наличие в прошлом тяжелых аллергических реакций на какой-либо из компонентов вакцины против COVID-19; 
• наличие активного заболевания или симптомов COVID-19; тем не менее вакцинация может быть проведена после исчезновения первичных симптомов.

В пограничных ситуациях посоветуйтесь с врачом

В остальных случаях, которые в России находятся среди противопоказаний, (беременность, кормление грудью, анафилаксия в прошлом, не связанная с компонентами вакцины от коронавируса) ВОЗ рекомендует посоветоваться с врачом и взвесить все за и против.

Дело в том, что часто эти состояния упоминаются в инструкции в разделе «Противопоказания» или других разделах, призывающих проявить настороженность, не потому что есть прямые доказательства вреда от препарата в этих случаях, а потому что данных об эффективности и безопасности такого средства у таких пациентов очень мало или вообще нет.

И хотя в тех странах, где дают такие рекомендации, нет опыта вакцинации российскими препаратами, позиция ВОЗ (в теории, но законной силы эти рекомендации не имеют).

В России противопоказанием к вакцинации также считаются острые инфекционные и неинфекционные заболевания. «Это связано с тем, что развитие осложнения основного заболевания или его неблагоприятный исход могут быть истолкованы как следствие проведенной вакцинации», — пишут в российских правилах. После выздоровления можно привиться через две-четыре недели.

А при нетяжелых ОРВИ, острых кишечных заболеваниях и других подобных заболеваниях прививаться можно сразу после того, как температура стала нормальной. Например, Консультативный комитет по практике иммунизации США пишет, что острые заболевания средней тяжести или протекающие тяжело — повод отложить вакцинацию.

Однако пациентов прививают, как только их состояние улучшается.

Обострения хронических заболеваний считаются в России противопоказаниями, наличие некоторых из них — пограничной ситуацией, когда решение о вакцинации принимается вместе с врачом:

• хронические заболевания печени;
• хронические заболевания почек;
• выраженные эндокринные заболевания;
• тяжелые заболевания системы кроветворения;
• заболевания центральной нервной системы (например, эпилепсия);
• заболевания сердечно-сосудистой системы (например, миокардит или эндокардит);
• аутоиммунные заболевания.

Также «КовиВак» рекомендуют вводить с осторожностью, если есть заболевания бронхолегочной системы (например, бронхиальная астма), желудочно-кишечного тракта и аллергические заболевания.

В инструкции к «ЭпиВакКороне» упомянуты злокачественные новообразования, первичные и вторичные иммунодефициты (ко вторичным относится, например иммунодефицит на фоне ВИЧ-инфекции), а также аллергические реакции.

«Спутник V» используется с осторожностью при злокачественных новообразованиях.

Если вам нужно больше информации, перед вакцинацией изучите хорошие источники. Хотя в этих источниках часто пишут про вакцины, которые недоступны в России, компоненты «Спутника» больше всего похожи на вакцины производства Johnson & Johnson (первый компонент) и CanSino (второй компонент), а также в целом на вакцину AstraZeneca и другие аденовирусные вакцины.

К сожалению, в России есть проблема с избыточными медицинскими отводами. Эта проблема даже специально выделяется в официальных методических указаниях. Поэтому будьте готовы к тому, что вас безосновательно попытаются отговорить от вакцинации, и знайте правила.

Не откладывайте прививку, даже если недавно болели

Нет необходимости проверять уровень или просто наличие антител от перенесенной болезни, а также узнавать, есть ли у вас ковид сейчас (об этом говорят разные структуры, в том числе российский Минздрав). Даже если у вас уже выработались антитела, вакцинация не должна навредить и может даже улучшить ситуацию, простимулировав иммунный ответ снова.

Кроме того, ВОЗ считает, что из-за распространения новых, более опасных штаммов можно вакцинироваться после болезни, не выжидая полгода или какой-то другой длительный срок (хотя ВОЗ подчеркивает, что определенности в этом вопросе мало).

О том, какой интервал выдержать после выздоровления, лучше поговорить с врачом: обоснованных официальных рекомендаций на этот счет нет.

Если вы недавно общались с человеком, у которого подтвердился ковид, и находитесь на карантине, то единственная причина, почему вам не стоит вакцинироваться, — риск передать вирус медицинским работникам. О рисках для здоровья при вакцинации в начале болезни неизвестно.

В других исследованиях вроде общего анализа крови или мочи также нет необходимости.

Определитесь с вакциной

Так как в России можно привиться от коронавируса тремя довольно разными препаратами, вероятно, стоит заранее определиться, какой вас устраивает больше.

К сожалению, данные об эффективности опубликованы только для «Спутника V». В остальных случаях есть большая неопределенность. Более того, в случае «ЭпиВакКороны» пока нет объективных оснований ожидать, что эта вакцина может быть эффективна.

Запишитесь на прививку или, если возможно, идите без записи

Вакцинация от ковида в России бесплатна. Но перед ней требуется осмотр врача (за него, а также непосредственно за процедуру введения вакцины в частных клиниках может потребоваться оплата). В некоторых случаях на прием нужно записываться (например, через «Госуслуги», там потребуются и номер полиса обязательного медицинского страхования), где-то можно прийти без записи.

Возьмите с собой документы

По правилам, утвержденным Минздравом, у вас с собой должен быть паспорт (или , удостоверяющий личность), СНИЛС либо полис обязательного медицинского страхования.

Так в медицинской организации поймут, что вы гражданин России (в стране почти никто не прививает иностранцев), и смогут внести вас в регистр вакцинированных. Однако учтите, что в частных клиниках вас не смогут принять без документа, удостоверяющего личность.

В московских правилах ничего не написано про СНИЛС. По этой и другим причинам лучше уточнить, какие документы требуются в конкретном учреждении.

Проверьте, какую вакцину вам вводят

18 июня 2021 года «Новая газета» сообщила, что в некоторых случаях в прививочных кабинетах «Спутник V» заменяют на «ЭпиВакКорону» (иногда без предупреждения, и это незаконно).

Перед введением вакцины медицинский работник должен проверить, тот ли это препарат и не истек ли срок его годности, и вы имеете полное право попросить его сделать это вслух (помните, что на этикетке у «Спутника V» будет написано «Гам-КОВИД-Вак»; у остальных вакцин официальные и всем известные названия совпадают). Или вы можете попросить показать вам флакон либо ампулу (в некоторых учреждениях внутренние правила таковы, что медицинские работники сами предлагают пациентам посмотреть ампулу или флакон). Если медицинский работник отказывается прочитать вслух данные с этикетки или показать ее — это повод насторожиться. Если в процессе выясняется, что вам собираются ввести не тот препарат, на который вы соглашались, вы можете отказаться.

Все зарегистрированные в России вакцины вводятся двукратно. Если вы приходите, чтобы получить вторую дозу, а вам предлагают привиться вторым компонентом другого препарата, стоит отказаться.

Например, по британским правилам это приемлемо только в исключительных случаях. По информации ВОЗ, «пока недостаточно данных для того, чтобы рекомендовать такого рода комбинацию».

Хотя такие исследования ведутся — просто нет тех, в которых бы участвовали две российские вакцины.

Следите за своим состоянием

После прививки, как и после использования любого препарата, могут возникнуть нежелательные реакции. Они описаны в инструкции. Часто это боль в месте введения, повышенная температура и головная боль.

У «Спутника V», который изучен лучше, в инструкции есть и другие нежелательные реакции — в основном это гриппоподобные симптомы (озноб, боль в мышцах и суставах, общее недомогание).

В этих случаях рекомендуется использовать , если нет противопоказаний. Или парацетамол.

Если у вас появились симптомы, которые не указаны в инструкции, стоит обратиться к врачу и настоять на том, чтобы он заявил о нежелательной реакции в Росздравнадзор.

Благодаря этому можно отследить эффекты, которые не заметили при первых исследованиях вакцины. Еще Минздрав рекомендует вести «Дневник самонаблюдения» на «Госуслугах».

При серьезных поствакцинальных осложнениях государство выплачивает компенсацию.

Соблюдайте меры безопасности

Рекомендации медицинских организаций, как себя вести после вакцинации, отличаются в разных странах. Кто-то (таких большинство) рекомендует соблюдать все те же меры безопасности. Кто-то считает, что привитые могут пренебречь мерами защиты без вреда для чьего бы то ни было здоровья.

Однако в России соблюдать меры защиты (носить маску, соблюдать положенную дистанцию) должны все — и привитые, и непривитые.