Иммуноблот на сифилис – что это за анализ, как проводится?

Иммуноблот при сифилисе на Джи и М антитела — высокочувствительное, специфичное исследование. Позволяет опровергнуть/подтвердить диагноз при получении неопределенных или позитивных данных, полученных при помощи классических тестов. Отличается информативностью и 99-100% достоверностью.

Метод рекомендован как референтный (максимально точный) при необходимости выполнения дифференциальной диагностики, для подтверждения диагноза латентного сифилиса.

Лабораторная диагностика сифилиса

• Серологические исследования базируются на иммунных связях, которые наблюдаются в сыворотке крови.
• Белковые соединения сливаются с антигенами, в результате этого взаимодействия антигены микробов купируются.
• После внедрения возбудителя (Treponema pallidum) в организме начинают вырабатываться защитные антитела.
• Они атакуют микробы и предотвращают распространение болезни.
• Для анализа берется кровь, добавляется в нее суспензия микробов.
• Если реакция не произошла — человек здоров, произошла — болен.
• Иммуноглобулины при сифилисе (иммуноглобулины к бледной трепонеме) — белки-защитники, продуцируемые для его нейтрализации.
• Они выявляют инфекцию в крови, ее остатки после проведенной терапии.
• Каждый из антител к Treponema pallidum имеет конкретный информативный статус, назначение и конфигурацию.

Иммуноглобулины А при сифилисе

1. Осуществляют контроль за местным иммунным ответом — ранней защитой, реагирующей на попадание инфекционного агента в определенный сегмент организма.

2. Производятся в значительной концентрации на слизистых кишечника, легких, полости рта, в незначительной — в крови.

3. Являются маркером активной инфекции, считаются неспецифическими, поскольку дают ответ и на другие бактерии.

Иммуноглобулины М при сифилисе

• Курируют общий иммунитет.
• Отличаются слабой специфичностью.
• Способствуют эвакуации антигенов, предупреждают их фиксацию в тканях и запуск патологических процессов.
• Их наличие указывает на активную стадию заболевания, после лечения эти белки пропадают.

Иммуноглобулины G при сифилисе

1. Основные иммуноглобулины вторичного иммунитета.
2. Обеспечивают высокую напряженность иммунного ответа в течение длительного срока.
3. Клетки памяти этих белков организм способен продуцировать несколько лет после приема профильных лекарственных препаратов.

Что такое титры иммуноглобулинов и как они падают

• Титры иммуноглобулинов — термин, применяемый для определения концентраций белковых молекул.
• На 4-5 сутки после заражения в крови определяются IgA.
• Но вследствие того, что данный период инфекционного процесса выраженной клиники не дает, анализы на них проводятся крайне редко.
• Через 7-8 суток после инфицирования клетки плазмы начинают синтезировать IgM.
• Белки вырабатываются в первичном/вторичном периоде сифилиса, в третичном — ликвидируются.
• Контролировать, как падает их концентрация, очень важно для оценки качества лечения.
• Если на протяжении 2-3 недель после их титры снижаются медленно, можно говорить о микробиологической неэффективности назначенной терапии.
• Иммуноглобулины класса G появляются спустя 35-40 дней после заражения
• Через 55-60 суток их уже можно увидеть в обычных скрининговых анализах.
• Когда исчезают из крови иммуноглобулины при сифилисе?
• IgM продуцируются 3-4 года после подтвержденной клинической ремиссии.
• У некоторых пациентов белок способен выделяться на протяжении всей жизни, что не гарантирует 100% защиты от повторного заражения.

Иммуноглобулины при сифилисе: кто назначает, когда проводится анализ

Исследование назначает врач дерматовенеролог.

1. На анализ могут направить и другие врачи — терапевт, уролог, гинеколог, инфекционист или хирург.
2. Специфические антитела M появляются через одну-две недели после внедрения возбудителя в организм.
3. Максимальная концентрация трепонемы фиксируется на 40-60 день, пропадает — спустя 3-5 месяцев после лечебного курса, 12-18 месяцев — без бактериальной терапии.
4. Выявляются у лиц на первой/второй фазе сифилиса.
5. Позволяют установить точные сроки заражения.  
6. IgG обнаруживаются на 25-30 сутки патологического процесса.
7. Их титры постоянно растут, максимальная концентрация отмечается через 2 года после инфицирования.
8. Особой подготовки тест не требует: перед забором крови пациенту нужно воздержаться от еды и курения 4-5 часов.
9. От употребления спиртосодержащих напитков — 24 часа.

Показания:

• наличие явной клинической симптоматики;
• сомнительные/положительные результаты, полученные в ходе предыдущих тестов, особенно на фоне онкологии, туберкулеза, алкоголизма, диабета в анамнезе;
• подозрение на болезнь при приеме антисептических и антибактериальных препаратов;
• врожденная форма;
• половой акт с больным человеком;
• ВИЧ-инфекция;
• выявленные венерические болезни;
• язвенные поражения гениталий;
• нейросифилис.

Интерпретация результатов иммуноблота при сифилисе

• Положительный результат указывает на недавнее заражение.
• Повторный (+) при проведении исследования через 1-1,5 месяца служит подтверждением диагноза сифилис.
• Обнаружение IgM у новорожденных младенцев говорит о наличии сифилитической инфекции.
• Поскольку плацентарная передача материнских IgM невозможна.
• Отрицательный результат предполагает 2 варианта событий: инфицирования не было, анализ был проведен до выраженной реакции иммунной системы.
• В сомнительных случаях через 7 дней проводится еще одно тестирование.
• Критерии положительности иммуноблота:

• (+): для M — 1 четкая полоса, для G — 2 четких полосы;
• (-): для G, M — полосы отсутствуют;
• (-/+): для G — 1 четкая полоса, для M — 1 слабая полоса.

Сравнение с другими методами анализов на сифилис

В клинической практике для скринингового (предварительного) обследования на сифилис проводят исследование РМП или улучшенный вариант (РПР).

При положительных данных ставится подтверждающий трепонемный тест — ИФА, РПГА, РИТ (РИБТ), РИФ:

• РМП. Нетрепонемный экспресс-тест, определяющий антитела к трепонеме, срок выполнения — 24 часа. Реакция микропрецепитации позволяет выявить первичный и вторичный сифилис. Показанием к проведению исследования служит наличие симптомов заболевания (сыпь на кожных покровах, язвы на половых органах, увеличенные лимфоузлы). Достоверность теста составляет около 80%;
• РПР. Современный аналог классического анализа Вассермана, обнаруживает антикардиолипиновый тип антител. Реакция плазменных реагинов — модификация РМП, различие между ними заключается в технологических особенностях проведения. Достоверность РПР — 70% (первичная форма), 98% (вторичная форма);
• ИФА. Иммуноферментный тест выявляет иммуноглобулины G, M, применяется в качестве подтверждающего или предварительного анализа на сифилис. Дает позитивный результат с 8-10 недели инфицирования, помогает оценить длительность болезни у пациентов со скрытой, бессимптомной, атипичной клинической картиной, подобрать эффективную индивидуальную терапию. Достоверность ИФА составляет 97-98%;
• РПГА. Реакция пассивной гемагглютинации используется для определения сифилиса любой формы. Диагностическая ценность РПГА при ранней диагностике — 87%, на 2-3 — 98-99%;
• РИТ(РИБТ). Реакция иммобилизации Treponema pallidum базируется на процессе обездвиживания возбудителя в контакте с исследуемой сывороткой. Анализ дает позитивный результат через 3 месяца после инфицирования. Методика чувствительна, надежна, но в техническом отношении представляет определенные сложности — требует специального оборудования, долго выполняется. Достоверность составляет 100% при позднем, раннем, вторичном сифилисе, 90-93% при атипичных формах;
• РИФ. Позволяет определять антитела класса А, уступает РИТ по специфичности. Реакция иммунофлюоресценции дает (+) при латентном/вторичном сифилисе, показывает 95% достоверность при врожденном/третичном сифилисе.

1. Главное преимущество иммуноблота по сравнению с другими тестами заключается в том, что ответ антиген-антитело не требует дорогих технологий и зависит от массы белка.
2. 
3. Второй плюс — на результат не влияют отсутствие растворимости, нестабильность антигенов.
4. В анализе есть возможность определить реакцию иммуноглобулинов с несколькими антигенами.
5. Это имеет большую диагностическую ценность, особенно в сложных случаях.
6. Тест достаточно прост в исполнении, при необходимости позволяет выявить IgM, IgG изолированно друг от друга.

Ложноположительные и ложноотрицательные анализы на сифилис

• Ложные серологические реакции могут быть обусловлены качеством реагентов, погрешностями в ходе выполнения исследования, техническими неточностями.
• Ложноотрицательные анализы выдаются при нарушениях сроков хранения приборов для диагностики.
• Это влечет за собой снижение чувствительности реакции.
• Ложноположительные результаты возникают вследствие ошибок при приготовлении сывороток, неравномерной концентрация антигена, нарушений при заборе крови.
• Инфекции/состояния, при которых фиксируются ложноположительные результаты:

• беременность;
• пневмония;
• мононуклеоз;
• ВИЧ;
• гепатит;
• онкологический процесс.

Причины ложноотрицательных реакций:

• иммунодефицитные состояния;
• наличие конкуренции между G и M иммуноглобулинами;
• при ИФА ложный результат может быть обусловлен иммунной недостаточностью, ВИЧ (вторичный сифилис), наличием серонегативной фазы (первичный сифилис).

Если тест вызывает сомнения, целесообразно его повторить через 5-10 дней, пройти дополнительные обследования по назначению врача-венеролога.

Для диагностики сифилиса обращайтесь к автору этой статьи – венерологу в Москве с многолетним опытом работы.

Источник: https://kvd-moskva.ru/immunoglobuliny-pri-sifilise/

Иммуноблот на сифилис

Иммуноблот на сифилис – относительно новый метод серологического исследования крови. В последние годы получил развитие и активное применение с целью эффективной и надежной диагностики сифилиса.

Иммуноблот — современный высокоточный безопасный диагностический тест, позволяющий с точностью подтвердить или опровергнуть диагноз сифилитической инфекции. С помощью данного метода в плазме крови определяется наличие и уровень антител (Ig М и Ig G), которые иммунная система человека продуцирует в ответ на внедрение инфекции.

Кроме того, анализ отличает высокая чувствительность и специфичность при стертом бессимптомном течении сифилиса. Иммуноблот используется только с диагностической целью и не подходит для контролирования процесса лечения.

Описание метода

Иммуноблот относится к группе так называемых «трепонемных тестов», при выполнении которых используют специфические антигены, характерные только для возбудителя сифилиса – бледной трепонемы. Тогда как «нетрепонемные тесты» могут обнаруживать антитела возбудителя или тканей самого человека и показывать положительный результат при отсутствии инфекции в организме.

В ходе линейного иммуноблоттинга бледную трепонему (выделенную из инактивированных штаммов или при помощи генной инженерии) способом гелевого электрофореза разделяют на специфические растворимые антигены (белки), глико- и липопротеины согласно их молекулярным размерам. Затем разделенные белки (антигены) транспортируют на специальную нитроцеллюлозную мембрану, где происходит обработка точек исследуемой сывороткой крови и иммуноглобулинами.

Если антитела присутствуют в крови больного, на тесте образуются полоски. Учитывая визуально их расположение и интенсивность, судят о результатах.

Критерии оценки анализа

• Отрицательный: для антител класса IgG и IgМ – полос нет;
• Неопределенный: для антител класса IgМ – одна нечеткая полоса, для IgG – четкая;
• Положительный: для антител класса IgМ – одна и более четкая полоса, для IgG – две и более четкие полосы.

Расшифровка результатов

Положительный результат свидетельствует о недавнем инфицировании. Последующий положительный анализ на определение IgG, проведенный на 1-1,5 месяца позже, подтверждает данный факт.

Наличие IgM у новорожденных детей указывает на диагноз сифилитической инфекции, так как передача материнских IgM через плаценту во время беременности исключена.

Отрицательный ответ говорит о том, что заражение сифилисом пациента не произошло или же тест был проведен ранее, чем успела отреагировать иммунная система.

В случае неопределенной интерпретации результатов анализ целесообразно повторить через определенное время, или же провести тестирование на наличие IgM к другим белкам бледной трепонемы. Как правило, такое состояние возникает у лиц с перенесенным сифилисом в анамнезе и определяется термином «серорезистентность».

Вероятность развития ложноположительных реакций сравнительно низка.

Преимущество иммуноблота перед остальными тестами состоит прежде всего в том, что реакция «антиген-антитело» зависит от молекулярной массы белка, и не требует участия дорогостоящих технологий. Кроме того, на результат иммунного ответа не влияет определенные свойства субстрата, нестабильность и отсутствие растворимости некоторых антигенов.

В анализе можно выявить реакцию антител с более, чем одним антигеном, что в сложных диагностических ситуациях имеет большую ценность. Также метод прост в исполнении и позволяет определить IgG и IgМ отдельно, если это необходимо.

Иммуноблот показывает высокую эффективность по выявлению иммунного ответа организма, как при получении антибактериальной терапии, так и без нее.

Используемые антигены

Для проведения тестирования применяют 5 основных антигенов:

• 47 кДа мембранный белок (TpN47) – специфичный;

• 45 кДа (TmpA) – специфичный;
• 22 кДа (Р 22) – неспецифичный;
• 17 кДа мембранный белок (TpN17) – специфичный;
• 15 кДа мембранный белок (TpN15) – специфичный.

Считается, что выявление антител к протеинам именно с такой молекулярной массой является диагностически значимым для сифилиса.

Один из антигенов Р 22 является неспецифичным для бледной трепонемы, именно поэтому появление полосы на этом белке может обусловить ложноположительный результат обследования.

Состояния, при каких показано обследование методом иммуноблота

• Наличие клинических признаков заболевания;
• Положительные или сомнительные результаты предыдущих серологических исследований, особенно при следующих заболеваниях и состояниях: туберкулез, онкологический процесс, болезнь Лайма, сахарный диабет, вакцинация, наркозависимость, хронический алкоголизм, гиперлипидемия, беременность, возраст старше 70 лет и т.д.
• Подозрение на первичный и вторичный сифилис при отрицательных ответах других тестирований;
• Подозрение на сифилис на фоне приема антибиотиков, других антисептических препаратов;
• Подозрение на скрытый сифилис;
• Все язвенные поражения органов половой системы;
• Половой контакт с больным сифилисом в анамнезе;
• Наличие сопутствующего венерического заболевания;
• Врожденная форма сифилиса;
• Нейросифилис;
• Сифилис внутреннего уха;
• ВИЧ-инфекция;
• Сопутствующие аутоиммунные заболевания (системная красная волчанка, ревматоидный артрит, узелковый периартериит, системная склеродермия, сахарный диабет и т.д.)

Сроки определения противотрепонемных антител

Специфические антитела против возбудителя сифилитической инфекции (Ig M) появляются в организме спустя 7-14 дней после инфицирования с максимальным уровнем на 6-9 неделе.

Исчезают  — через 12-18 месяцев у лиц, не получавших антибактериальную терапию, и через 3-6 месяцев – после проведения полноценного курса лечения.

Противотрепонемные антитела класса Ig G появляются позже, примерно к концу первого месяца инфекционного заболевания и обычно сохраняются на протяжении долгого времени или всей жизни. Их концентрация постоянно растет и максимально фиксируется через 1-2 года после первой встречи организма с бледной трепонемой.

К моменту появления первых признаков болезни в крови больного можно выявить оба класса антител.

Появление IgM снова в крови больного свидетельствуют о повторном заражении сифилисом, его рецидиве или неэффективной лечебной тактике.

Подготовка к правильной сдаче анализа

Определенной подготовки к проведению теста не требуется. Среди общих рекомендаций – взятие образца крови не ранее чем через 24 часа после употребления алкоголя, воздержание от курения.

Источник: https://stojak.ru/venericheskie-zabolevaniya/sifilis/immunoblot-na-sifilis.html

Анализ иммуноблот на сифилис — особенности исследования

Иммуноблот представляет собой современный безопасный метод тестирования, отличающийся высоким уровнем точности, используемый с целью диагностики сифилиса. Специфика анализа заключается в исследовании плазмы крови и выявлении в ней антител (Ig М и Ig G), которые вырабатываются в ответ на присутствие бактерии бледной трепонемы в организме.

Метод иммуноблота на сифилис отличается высоким уровнем чувствительности, что позволяет определить инфекционное поражение на первичных стадиях и на фоне отсутствия симптоматики. Недостатком анализа является возможность применения данного способа только с целью подтверждения факта наличия заболевания, но не осуществления контроля над процессом его лечения.

Характеристика методики

При подозрении на сифилис на первичных этапах диагностических мероприятий используются так называемые нетрепонемные тесты, которые позволяют определить антитела в крови к возбудителю заболевания.

Для подобных способов является характерным низкий уровень точности, возможно получение положительного результата даже при отсутствии бледной трепонемы в организме, так как антитела могут вырабатываться и при других заболеваниях.

Данные исследования расцениваются в качестве ориентировочных методов, в числе их преимуществ — затрата малого количества времени на получение результатов, дешевизна, широкая доступность для населения.

При получении положительного результата нетрепонемных тестов требуется проведение высокоточного тестирования (трепонемного), которое позволит точно определить наличие возбудителя сифилиса, а также продолжительность заражения. В этом случае и проводят иммуноблот, при котором используются специфические антигены, являющиеся свойственными исключительно для антител бледной трепонемы.

Критерии оценки

Если антитела есть в крови больного, на данном тесте будут образовываться специальные полоски. Их оценивают визуально по расположению и интенсивности, на основании чего делают выводы:

• Положительный – для антител, отнесенных к классу IgM является характерным присутствие единичной насыщенной полосы, для IgG – несколько выраженных линий.
• Неопределенный – IgM – слабовыраженная единичная полоса, IgG – одна четкая линия.
• Отрицательный – IgM, IgG – отсутствие полос.

Расшифровка результатов

В ходе проведения иммуноблота могут быть получены положительные, отрицательные, неопределенные результаты:

• Положительные результаты говорят о недавнем заражении сифилисом. Процент неинтерпретирумых и ложноположительных результатов крайне низок, так как метод выявления сифилитической инфекции характеризуется в качестве высокоточного. При задействовании непосредственно иммуноблота используются специфические антигены, являющиеся свойственными исключительно для бледной трепонемы.
• При отсутствии полос на мембране вероятность инфицирования бледной трепонемой не исключена. Отрицательный результат может говорить о сравнительно недавнем заражении, в ответ на которое иммунная система не успела спродуцировать выработку антител. При наличии подозрений на инфицирование рекомендуется провести повторное исследование через несколько недель.
• При получении неопределенных результатов требуется проведение повторного тестирования. Как правило, подобное случается на ранних этапах заражения бледной трепонемы, а также при допущении ошибок при проведении иммуноблота, сифилис в данном случае может отсутствовать.

Сколько можно болеть сифилисом, как заболевание влияет на срок жизни?

Причины неопределенных результатов

Спровоцировать получение ложноположительных или неопределенных результатов иммуноблота могут различные факторы, в числе которых приводятся следующие:

• Период беременности. Особенно часто подобное наблюдается у женщин в период третьей или последующих гестаций. Причина получения неверных результатов заключается в разбалансировке гормонального фона.
• Прохождение в недавнем времени процедуры вакцинирования.
• Перекрестные реакции аллергического характера.
• Вирусные поражения организма. Чаще подобное наблюдается при инфицировании гепатитом или гриппом.
• Воспалительные процессы, поражающие сосудистую систему организма.
• Нарушения состава крови – низкий уровень свертываемости или, напротив, повышенная густота.
• Туберкулез, протекающий на различных стадиях.
• Аутоиммунные поражения печени.
• Использование в ходе проведения исследования неспецифичных антигенов.

Для определения инфицирования или подтверждения отсутствия в организме бледной трепонемы рекомендуется повторное проведение исследования не ранее, чем через 2-3 недели после первой процедуры.

Показания к проведению

Иммуноблот может быть рекомендован специалистом пациенту при подозрении на сифилис. В иных ситуациях показаниями к исследованию могут быть следующие состояния:

• Появление симптоматики, косвенно либо прямо указывающей на вероятность заражения бледной трепонемой.
• Наличие подозрений на развитие сифилиса первичной или вторичной формы на фоне получения отрицательных данных при иных вариантах исследования. В таких ситуациях иммуноблот необходим, если другие тесты демонстрируют отрицательный результат, однако развернутая клиническая картина указывает на наличие заболевания.
• Наличие изъязвлений, схожих на шанкры при сифилисе. В качестве показаний могут выступать поражения кожных покровов, расположенные в полости рта, в зоне половых органов.
• Заболевания, имеющие венерическую природу происхождения (ВИЧ, гепатит).
• Врожденная форма сифилиса.
• Различные варианты аутоиммунных заболеваний, в числе которых красная системная волчанка, сахарный диабет, ревматоидный артрит.
• Незащищенный половой контакт с лицом, которое предположительно заражено сифилитической инфекцией.

Также к числу показаний относят получение неинтерпретируемых, сомнительных или положительных данных при методах, обладающих низким уровнем точности. Как правило, подобное происходит при стандартных исследованиях при ряде заболеваний, в числе которых туберкулез, болезнь Лайма, сахарный диабет, а также состояние беременности, алкогольная и наркотическая зависимость.

Сроки определения противотрепонемных антител

Нужно знать, что ни один, даже самый точный метод, в том числе, иммуноблот, не позволит получить точных данных, если заражение сифилисом произошло несколько дней назад.

Обусловлено это тем, что болезнетворные микроорганизмы находятся в инкубационном периоде на ранних этапах внедрения в организм, соответственно, иммунная система в указанные сроки не начинает продуцировать антитела, выявляемые в ходе проведения иммуноблота.

• Продуцирование организмом антител IgM для борьбы с проникшей в организм сифилитической инфекцией начинается в период с седьмого по четырнадцатый день заражения сифилисом. Но вероятность обнаружения их в это время даже посредством высокоточных анализов крайне мала. Максимальной концентрации уровень антител достигает в период с шестой по девятую неделю инфицирования.
• Полное исчезновение выявляемых анализом IgM происходит через три – шесть месяцев после курса терапевтического лечения. Если больной не получал лечение, подобное наблюдается через год – полтора после внедрения в организм сифилитической инфекции. Выявление антител возможно при первичном и вторичном периоде заболевания. При этом определение может быть исключено в том случае, если сифилис протекает в скрытой форме. Появление IgM после полного исчезновения говорит о повторном заражении или низкой эффективности лечения.
• Выработка организмом специфических антител, отнесенных к классу IgG, начинается примерно через четыре – пять недель с момента внедрения бледной трепонемы в организм. В отличие от IgM, концентрация IgG постоянно увеличивается, достигая максимальной величины к двенадцати – двадцати четырем месяцам после инфицирования и сохраняясь на протяжении нескольких лет или всей жизни даже при условии успешного лечения.

Когда возникает сифилис суставов и костей, как проявляется и лечится?

Подготовка к анализу

Необходимость в проведении специальной подготовки к иммуноблоту отсутствует, как таковая. Однако с целью получения точных результатов пациенту может быть порекомендовано соблюдение следующих правил:

• Отказ от приема пищи минимум за восемь часов до процедуры. Так как анализ рекомендуется проводить в утренние часы, важно в день его проведения исключить завтрак до забора биологических материалов.
• Исключить тяжелые физические нагрузки.
• Отказаться от потребления напитков, содержащих алкоголь, за один – три дня до процедуры.

Важно помнить, что получение положительных результатов при проведении иммуноблота не всегда говорит о заражении сифилитической инфекцией, так как всегда есть вероятность ложных данных. Подобное может произойти не только на фоне причин перечень которых приведен выше, но также ввиду человеческого фактора, то есть, ошибки, допущенной лаборантом при исследовании.

Для точной диагностики рекомендуется прохождение повторного исследования. Особенно важно сделать это, если в анамнезе присутствуют ситуации, подразумевающие риск инфицирования, однако клиническая картина заболевания исключена.

Источник: https://venerbol.ru/sifilis/immunoblot.html

Сифилис, подтверждающий тест (иммуноблот) IgM

Сифилис, подтверждающий тест (иммуноблот) IgM — современный метод диагностики сифилиса, самый достоверный высокочувствительный метод идентификации белков.

Сифилис — инфекционное заболевание, вызываемое бледной трепонемой (Treponema pallidum), передающееся в основном половым путем, склонное к хроническому течению и поражающее большинство органов и систем организма.

Сифилис характеризуется медленным прогрессирующим течением. На поздних стадиях он может приводить к тяжелым поражениям нервной системы и внутренних органов.

• Клиническая картина при сифилисе
• Антитела класса IgM при сифилисе
• Используемые антигены в методе Вестерн-блота:

Клинические проявления сифилиса очень разнообразны и зависят от стадии заболевания. Выделяют несколько стадий сифилиса. Первичная стадия наступает примерно через 2–3 недели после заражения. На этой стадии проявляются одна или иногда несколько язв, называемых шанкром, как правило, на той части тела, которая контактировала с шанкром больного человека, например пенисом или влагалищем. Во многих случаях твердый шанкр безболезненный и остается незамеченным, особенно если он находится в прямой кишке или на шейке матки. Шанкр исчезает через 4–6 недель. Вторая стадия заболевания начинается через 2–8 недель после возникновения твердого шанкра. Она характеризуется появлением сыпи, чаще на ладонях и подошвах. Иногда встречаются и другие симптомы, к примеру лихорадка, усталость, опухание лимфатических узлов, боль в горле и ломота в теле. Сифилис способен протекать в скрытой форме, во время которой у инфицированного человека не проявляется никаких симптомов, но в то же время он продолжает оставаться носителем инфекции. Это может длиться годами. Без лечения примерно у 15% больных развиваются симптомы позднего, или третичного, сифилиса. Эта стадия иногда длится несколько лет и приводит к психическим заболеваниям, слепоте, неврологическим проблемам, болезням сердца и даже к смерти. От сифилиса можно избавиться с помощью антибиотиков (предпочтительно применять производные пенициллина). Причем на ранней стадии заболевание лечится легче и быстрее. При контакте человека с Treponema pallidum, его иммунная система вырабатывает антитела к бактерии. В крови могут быть обнаружены два вида таких антител: IgM и IgG. Антитела класса IgM вырабатываются организмом в первую очередь. Они выявляются в сыворотке крови в конце второй недели заболевания и исчезают у нелеченых больных примерно через 1–1,5 года, при лечении раннего сифилиса — через 3–6 мес., позднего — через год. Они присутствуют у большей части пациентов с первичным и вторичным сифилисом, поэтому тест на IgM может быть использован для различения давней инфекции от только приобретенной. Специфических трепонемных антител IgM нет у лечившихся в прошлом пациентов, но их отсутствие само по себе не говорит об эффективности проведенной терапии, поскольку у большинства из тех, кто не лечился, в скрытой стадии сифилиса IgM-антитела тоже отсутствуют. Исследование IgM антител к антигенам возбудителя сифилиса Treponema pallidum методом иммуноблота используют в качестве дополнительного специфического трепонемного теста при необходимости углубленного исследования при неубедительных результатах скрининговых и подтверждающих тестов диагностики сифилиса. Тест основан на методе Вестерн-блота. В ходе исследования выявляют наличие в сыворотке пациента антител класса IgG к электрофоретически разделенным и перенесенным на нитроцеллюлозную мембрану избранным антигенам возбудителя сифилиса Treponema pallidum.

• 47 кДа мембранный белок (TpN47) — специфичный;
• 45 кДа (TmpA) — специфичный;
• 22 кДа (Р 22) — неспецифичный;
• 17 кДа мембранный белок (TpN17) — специфичный;
• 15 кДа мембранный белок (TpN15) — специфичный.

Показания В комплексе тестов диагностики заболеваний, вызванных инфекцией Treponema pallidum (сифилис).

Подготовка

Кровь рекомендуется сдавать утром, в период с 8 до 12 часов. Взятие крови производится натощак, спустя 4–6 часов голодания. Допускается употребление воды без газа и сахара. Накануне сдачи исследования следует избегать пищевых перегрузок.

Интерпретация результатов

Формат выдачи результата исследования — качественный (описание наличия/отсутствия полос, характеризующих выявление антител к каждому из указанных антигенов; общее заключение о результате исследования в форме: положительный/отрицательный/неопределенный).  Референсные значения: отрицательный. При общей оценке результата учитывают положение окрашенных полос (специфичность антигена) и интенсивность их окрашивания (поскольку иногда возможна неспецифическая слабая ложная реакция с отдельными антигенами):

• Отрицательный результат: отсутствуют полосы специфических антигенов;
• Неопределенный результат: одна четкая полоса специфического антигена: р15 кДа, р17 кДа, р45 кДа или р47 кДа;
• Положительный результат: более одной четкой полосы специфических антигенов: р15 кДа, р17 кДа, р45 кДа или р47 кДа.

Примечание: для установления диагноза недавней инфекции Treponema pallidum, положительный результат по IgM-антителам должен быть подтвержден положительным результатом по IgG-антителам (сероконверсией), на свежем образце крови, взятом на 3–6 недель позднее.

Специфичность исследования 98%, чувствительность 100%. Положительная предсказательная значимость 94%.

Источник: https://dnkom.ru/analizy-i-tseny/diagnostika-sifilisa-vich/sifilis-podtverzhdayushchiy-test-immunoblot-igm/

Применение иммуноблота в диагностике сифилиса

В настоящее время перед специалистами лабораторной службы стоят новые задачи по повышению надежности и репрезентативности методов диагности­ки и лечения инфекционных заболеваний, среди которых важное место зани­мает сифилис. Во многом их решение зависит от уровня информативности применяемых методов исследования и расширения диагностических возмож­ностей.

В настоящее время перед специалистами лабораторной службы стоят новые задачи по повышению надежности и репрезентативности методов диагности­ки и лечения инфекционных заболеваний, среди которых важное место зани­мает сифилис. Во многом их решение зависит от уровня информативности применяемых методов исследования и расширения диагностических возмож­ностей.

Внедрение в практику иммуноферментного анализа (ИФА) вместо реакции Вассермана значительно повысило качество лабораторной диагностики сифилиса.

Существенным преимуществом данного метода является возможность авто­матизации процесса исследования, что позволяет снизить влияние человеческого фактора.

↯ Больше статей в журнале «Справочник заведующего клинико-диагностической лабораторией» Активировать доступ

Однако по-прежнему положительные серологические реакции на сифилис, в т. ч. на серорезистентность, являются проблемой для врачей и пациентов. Проблема достоверности положительных результатов исследований име­ет важное значение и для скрининга донорской крови.

Появление на российском рынке зарегистрированных в установленном по­рядке и разрешенных к применению наборов реагентов для определения антител классов и IgG к отдельным антигенам Treponema pallidum методом иммуно­блота (вестерн-блота — western blot) значительно расширило возможности вери­фикации лабораторного (а на его основе — клинического и эпидемиологического) диагноза сифилиса. Стандартизации и повышению качества работы серологиче­ских лабораторий в последние годы уделяется большое внимание. Совершенство­ванию лабораторной диагностики сифилиса посвящено немало работ, в т. ч. имеется и определенный опыт применения иммуноблота.

Все вышесказанное обосновывает целесообразность включения в алгоритм лабораторной диагностики сифилиса подтверждающего теста — иммуноблота (при положительном либо сомнительном результате тестирования крови мето­дом ИФА).

Данная система скрининга крови (первичная постановка (ИФА) по­вторная постановка (ИФА) для исключения внутрилабораторной ошибки с ис­пользованием тест-систем более высокой специфичности иммуноблот), которая в течение 20 лет используется в лабораторной службе диагностики ВИЧ-инфек­ции, может быть относительно быстро и с минимальными финансовыми вложе­ниями внедрена в работу серологических лабораторий для диагностики сифилиса.

Учитывая результаты исследований, проведенных нашими соотечествен­никами и зарубежными коллегами, по применению иммуноблота и обобщив собственный (с 2006 г.) опыт, предлагаю свой взгляд на про­блему серологической диагностики данного заболевания и возможность ис­пользования иммуноблота (предназначен для точной идентификации патоген-специфических антител) в качестве подтверждающего метода.

Для лабораторной службы первоочередной задачей является получение до­стоверного результата исследования биоматериала (крови, ликвора), что в усло­виях развития медицины (государственной и негосударственной) и системы медицинского страхования возможно при стандартизации лабораторных ис­следований. Стандартизация достигается следующим путем:

• стандартизация преаналитического этапа исследования — как за пределами лаборатории (использование закрытых систем взятия крови и игл-«бабочек», что значительно снижает частоту гемолиза; забор крови в пластиковые пробирки однократного применения; соблюдение сроков хранения и до­ставки проб), так и в самой лаборатории;
• проведение процедуры анализа образца биоматериала в соответствии с ин­струкцией;
• использование средств измерений, прошедших метрологический контроль;
• повторное исследование образцов крови с использованием применяемого метода (например, ИФА) либо иного метода, обладающего более высокой специфичностью (например, в реакции пассивной агглютинации желати­новых частиц, сенсибилизированных очищенными антигенами Tr. pallidum), и (или) иммуноблота в его модификациях для раздельного определения специфических антител классов IgM и IgG к наиболее значимым белкам возбудителя сифилиса;
• правильная оценка результатов на постаналитическом этапе, их внесение в журнал и бланк результата анализа.

Последний этап является весьма ответственным в деятельности врача ла­боратории, учитывая возможность причинения пациенту морального ущерба при информировании о положительном результате тестирования крови на си­филис, если в последующем он признается ложноположительным.

Несмотря на относительно высокую стоимость анализов при проведении ИФА и иммуноблота, использование комплекса лабораторных тестов вполне оправданно, т. к. этиологическая расшифровка определяет правомочность диагноза и принци­пиально влияет на тактику ведения пациента.

Причины получения ложноположительных результатов хорошо известны и подразделяются на две группы: не зависящие от лаборатории и зависящие от лаборатории.

Особо следует выделить причины ложноположительных результатов, не за­висящие от сотрудников лаборатории.

Наиболее часто неправильный результат встречается при определении специфических антител класса и может быть обусловлен наличием ревматоидного фактора, гиперпродукцией IgM при бере­менности, перекрестной реакцией с антигенами других возбудителей, аутоим­мунным процессом, нарушением обмена веществ, гиперлипидемией и др. В данном случае получить достоверный результат анализа позволяет использо­вание ряда лабораторных приемов, а именно:

• удаление ревматоидного фактора из сыворотки с использованием сор­бента;
• использование на первом этапе постановки либо в качестве уточняющих тестов высокоспецифичных тест-систем зарубежного или отечественного производства;
• повторное исследование сыворотки;
• применение в качестве подтверждающего теста иммуноблота (western blot-IgM), предназначенного для выявления антител именно класса IgM к от­дельным антигенам возбудителя.

Наряду с этим следует помнить, что антитела класса IgM являются показа­телем острого и активного инфекционного процесса. Обнаружение ДНК возбу­дителя (методом полимеразной цепной реакции) либо его антигенов прямыми методами или появление в динамике антител других классов в результате пере­ключения синтеза антител позволяют верифицировать диагноз.

При детекции антител класса IgG также может быть получен ложноположительный результат, связанный прежде всего с перекрестным реагированием антигенов и напрямую зависящий от специфичности тест-систем.

Для уточнения лабораторного диа­гноза и исключения ложноположительного результата следует применять иммуноблот (western blot-IgG), предназначенный для обнаружения антител класса IgG к отдельным высокоспецифичным белкам патогена.

С целью уточнения лабораторного диагноза и установления частоты лож-ноположительных результатов нами были подвергнуты анализу 295 образцов крови от пациентов, у которых при тестировании крови методом ИФА в раз­личных лабораториях выявлены антитела к Tr. pallidum. Материалом для иссле­дования служила сыворотка крови, взятая с применением закрытых систем в вакуумные пробирки.

Для подтверждения лабораторного диагноза были использованы наборы реагентов для определения антител классов и IgG, содержащие электрофо-ретически разделенные антигены Tr. pallidum: p15, p17, p22, p45 и p47.

Из них специфичными являются 4 белка: мембранный белок Tp47, TmpA (полоса на стрипе 45 кДа), мембранный белок Tp17, мембранный белок Tp15.

Наличие не­специфической полосы 22 кДа с антигеном Р22 имело принципиальное значе­ние и в ряде случаев объясняло наличие ложноположительного результата, по­лученного при проведении ИФА.

Все 295 образцов сыворотки крови были подвергнуты исследованию на присутствие антител класса IgG и 290 образцов — на присутствие антител клас­са к специфическим антигенам.

Результаты исследования показали, что по результатам подтверждающего теста (блота) 36,2% образцов были позитивны по и 75,6% образцов — по IgG.

Три образца имели неспецифическую полосу с антигеном Р22, что позволило сделать заключение об отсутствии лаборатор­ных признаков сифилиса.

При детекции наличие одной четкой полосы, указывающей на присут­ствие специфического антигена, расценивали как положительный результат, который был отмечен в 37 пробах (35,2% от числа позитивных проб). Полоса соответствовала: у 20 чел. — мембранному белку Tp47, 9 чел. — Tp17, 5 чел. -TmpA, 3 чел. — Tp15.

У 41 пациента присутствовали 2 специфических белка в различных комбинациях, в остальных случаях — 3 и 4 специфических белка.

У 68 пациентов с одной либо двумя положительными полосами, указывающими на присутствие антител класса М, обследованных в динамике, появились спе­цифические антитела класса IgG, что свидетельствовало о переключении синте­за антител и подтверждало развитие инфекционного процесса.

При оценке данных по IgG наличие одной полосы, которое имело место у 27 пациентов (в 12,0% случаев от серопозитивных в блоте), расценивалось как неопределенный (сомнительный) результат.

Нали­чие двух и более полос, указывающих на присутствие антител класса к спе­цифическим белкам, расценивали как положительный результат: у 44 чел. выяв­лены антитела к 2 белкам, у 42 чел. — 3 белкам и у 110 чел. — 4 белкам (р15, р17, р45, р47).

Таким образом, применение иммуноблота показало, что в 25% случаев ре­зультат исследования методом ИФА является ложноположительным, что обос­новывает необходимость применения подтверждающего теста и целесообраз­ность включения иммуноблота в медицинские стандарты.

Т.И. Долгих,руководитель центра, заведующая Центральной научно-исследовательской лабораторией,Центральная научно-исследовательская лаборатория и Академический центр лабораторной диагностики

• ГОУ ВПО «Омская государственная медицинская академия»
• Материал проверен экспертами Актион Медицина

Источник: https://www.provrach.ru/article/3084-primenenie-immunoblota-v-diagnostike-sifilisa

anti-Treponema pallidum, IgG (иммуноблот)

[07-156] anti-Treponema pallidum, IgG (иммуноблот)

2695 руб.

Исследование, направленное на диагностику антител к Treponema pallidum класса IgG методом иммуноблотинга в целях диагностики или подтверждения сифилиса, а также для дифференциальной диагностики свежеприобретенного и давнего инфицирования T. рallidum.

• Синонимы русские
• Антитела класса IgG к возбудителю сифилиса; иммуноглобулины класса G к антигенам Тreponema pallidum.
• Синонимы английские

Syphilis IgG; anti-Treponema pallidum, IgG; anti-TP IgG; antibodies to Т. pallidum, IgG; immunoblotting.

1. Метод исследования
2. Иммуноблотинг.
3. Какой биоматериал можно использовать для исследования?
4. Венозную кровь.
5. Как правильно подготовиться к исследованию?

• Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Сифилис является одним из наиболее распространенных инфекционных заболеваний, передающимся преимущественно половым путем при непосредственном контакте с сифилитической язвой (твердым шанкром).

Возможен и вертикальный путь передачи от инфицированной матери к плоду, а также через кровь и реже при контакте с контаминированными предметами. Источником инфекции является больной человек, возбудитель инфекции – Treponema pallidum (T.

pallidum), семейство Spirochaetaceae, род Treponema.

Соответственно клиническому течению заболевания, классифицируют несколько стадий сифилиса: первичную, вторичную, латентную и третичную. Первичный сифилис возникает на 14-21-й день заражения и проявляется возникновением твердого шанкра в месте контакта и проникновения возбудителя.

Твердый шанкр представляет собой одну или несколько безболезненных язв, исчезающих в течение 2-6 недель без лечения. Возможно также увеличение регионарных лимфатических узлов. Вторичный сифилис диагностируется на 4-8-й неделе от момента появления твердого шанкра или на 2-3-й месяц после заражения.

Для него характерны следующие клинические проявления: розеолезно-папулезная сыпь преимущественно на ладонях и стопах, энантема на слизистых оболочках, слабость, лихорадка, головная боль, генерализованная лимфоаденопатия, тонзиллит, фарингит. Далее симптомы исчезают и инфекция переходит в латентную форму, возможно с возникновением рецидивов.

При нелеченном заболевании развивается третичный сифилис, проявляющийся поражением нервной системы, сердечно-сосудистой системы, костно-суставного аппарата.

Клиническая лабораторная диагностика играет важную роль в диагностике сифилиса в сочетании с эпидемиологической и клинической картинами заболевания. Чаще всего используются серологические методы лабораторной диагностики, основанные на выявлении антител.

Различают нетрепонемные и трепонемные тесты. Нетрепонемные тесты направлены на выявление антител к кардиолипину, фосфолипиду, компоненту клеточной и митохондриальной мембран бактерий.

К ним относятся реакция пассивной гемагглютинации, реакция иммунофлуоресценции, метод иммуноферментного анализа и метод иммуноблотинга.

Метод иммуноблотинга используется в качестве теста второй линии для подтверждения скрининговых методов исследования или в качестве дополнительной диагностики сифилиса, при подозрении на наличие данного заболевания, но отрицательных результатах других исследований. Он основан на определении антител классов IgM и IgG к молекулам-антигенам, разделенным с помощью метода электрофореза в соответствии с их молекулярной массой. Диагностическая чувствительность метода составляет 99 %, диагностическая специфичность – 100 %.

Известно несколько липопротеинов-антигенов наружной клеточной мембраны T. рallidum, которые обладают наибольшей иммуногенностью и играют важную роль в серологической диагностике сифилиса методом иммуноблотинга. К ним относятся следующие специфичные мембранные белки: Tp15 (15 кДа), Tp17 (17 кДа), Tp45 (45 кДа), Tp47 (47 кДа). Иммуноглобулины класса G к T.

pallidum появляются в крови через 3-4 недели после инфицирования. Их количество постепенно увеличивается, начиная преобладать на шестой неделе заболевания над уровнем иммуноглобулинов IgM. Антитрепонемные антитела класса IgG могут сохраняться на определённом уровне в течение месяцев и лет.

Уровень данных антител нарастает в зависимости от длительности заболевания.

Антитела к антигенам трепонем класса IgG играют важную роль в диагностике первичного, вторичного, третичного и латентного сифилиса. Для подтверждения ранее диагностированного инфицирования T. pallidum рекомендуется определение антител класса IgG через один-два месяца после обнаружения антител класса IgM, но обязательно в свежем образце крови.

По некоторым данным, антитела класса IgGк Tp17, Tp45 и Tp47 обнаруживаются при первичном сифилисе на его более поздних стадиях. Анти-Tp45 и анти-Tp47 IgG чаще встречаются при латентной форме сифилиса.

Через 24 месяца после проведенной патогенетической терапии у пациентов с первичным и вторичным сифилисом антитела класса IgGметодом иммуноблотинга не детектируются.

Для чего используется исследование?

• Для диагностики сифилиса;
• для подтверждения скрининговых методов исследования;
• для дополнительной диагностики сифилиса при подозрении на наличие данного заболевания, но отрицательных результатах других исследований;
• для дифференциальной диагностики свежеприобретенного и давнего инфицирования T. рallidum;
• для диагностики первичного, вторичного, латентного и третичного сифилиса;
• для профилактического обследования беременных женщин;
• для оценки проведенной патогенетической терапии сифилиса.

Когда назначается исследование?

• При подозрении на сифилис и при симптомах данного заболевания: наличие твердого шанкра, генитальных язв, лимфоаденопатии, слабости, лихорадки, розеолезно-папулезной сыпи преимущественно на ладонях и стопах, энантемы на слизистых оболочках;
• при подтверждении скрининговых методов исследования и для дополнительной диагностики сифилиса, при подозрении на наличие данного заболевания, но отрицательных результатах других исследований;
• при наличии полового партнера, больного сифилисом;
• при ведении беременностив целях профилактического обследования беременных женщин желательно на первом приеме гинеколога, при постановке на учет в женской консультации;
• при лечении от другого заболевания, передающегося половым путем;
• при определении точной причины заболевания, при наличии неспецифических симптомов, схожих с признаками сифилиса;
• если пациент был инфицирован, он должен повторить анализы на сифилис через 3, 6, 12 и 24 месяца для оценки проведенной патогенетической терапии против сифилиса.

• Что означают результаты?
• Референсные значения
• Мембранный белок TpN47: отрицательный.                             
• TmpA: отрицательный.                              
• Мембранный белок TpN17: отрицательный.                  
• Мембранный белок TpN15: отрицательный.
• Положительный результат:

• первичный, вторичный, третичный сифилис;
• латентный сифилис.

Отрицательный результат:

• отсутствие сифилиса;
• проведение диагностики на раннем сроке, когда не сформировался иммунный ответ против возбудителя T. рallidum;
• поскольку антитела IgG к T. pallidum могут свободно проникать через плаценту, положительный результат у младенцев не является основанием для постановки диагноза «врождённый сифилис»;
• отсутствие антител класса IgG у младенца, родившегося от инфицированной матери, не исключает наличия врождённого заболевания, поскольку на момент исследования антитела могут ещё не сформироваться.

Что может влиять на результат?

• Возможно получение ложноположительного результата при наличии ВИЧ-инфекции, болезни Лайма, малярии, аутоиммунных заболеваний, в частности системной красной волчанки, при атипичной пневмонии, у людей, употребляющих наркотики внутривенно, у пожилых.



Важные замечания

• Результаты данного исследования должны интерпретироваться только комплексно, с учетом анамнеза, клинических данных, результатов лабораторного обследования.
• Для подтверждения ранее диагностированного инфицирования T. pallidum рекомендуется определение антител класса IgG через один-два месяца после обнаружения антител класса IgM, но обязательно в свежем образце крови.
• Отрицательный результат иммуноблотинга не исключает наличие сифилиса.
• Если у пациента выявлено инфицирование, ему необходимо поставить в известность и своего сексуального партнера (партнершу), чтобы он (она) тоже прошел обследование и при необходимости лечение.

1. Также рекомендуется
2. [07-047] Treponema pallidum, IgG, титр
3. [07-048] Treponema pallidum, IgM, титр
4. [07-049] Treponema pallidum, антитела
5. [07-056] Сифилис RPR (антикардиолипиновый тест / микрореакция преципитации), титр
6. [07-070] Treponema pallidum, IgG в ликворе
7. [07-117] Сифилис РПГА (реакция пассивной гемагглютинации), титр
8. [07-157] anti-Treponema pallidum, IgM (иммуноблот)
9. Кто назначает исследование?
10. Дерматолог, дерматовенеролог, гинеколог, уролог, инфекционист, терапевт, врач общей практики, педиатр.
11. Литература

• Sun R, Lai DH, Ren RX, Lian S, Zhang HP Treponema pallidum-specific antibody expression for the diagnosis of different stages of syphilis / Chin Med J (Engl). 2013 Jan;126(2):206-10.
• Miranda AP, Sato NS Profile of anti-Tp47 antibodies in patients with positive serology for syphilis analized by Western Blot / Braz J Infect Dis. 2008 Apr;12(2):139-43.
• Wang LN, Li JM Evaluation of immunoglobulin M and G Western blot and ELISA for screening antibodies to Treponema pallidumin blood donors / Sex Transm Dis. 2009 Jul;36(7):413-6.
• Sato NS, Hirata MH, Hirata RD, Zerbini LC, Silveira EP, de Melo CS, Ueda M.Analysis of Treponema pallidum recombinant antigens for diagnosis of syphilis by western blotting technique / Rev Inst Med Trop Sao Paulo. 1999 Mar-Apr;41(2):115-8.

Источник: https://helix.ru/kb/item/07-156