Диагностика хламидиоза: посев на хламидии, иммунофлюоресцентный метод

Среди всех имеющихся заболеваний, которые распространяются половым путем, хламидиоз — одно из наиболее распространенных и опасных. Чтобы вовремя его выявить, докторами проводится анализ на содержание в организме пациента хламидийной инфекции. Посев на хламидии является наиболее эффективным способом провести диагностику данного заболевания. 

В каких случаях назначают

Хламидиоз является инфекционным заболеванием, возбудителями которого являются Chlamidia trachomatis — бактерии-паразиты, чаще всего попадающие в организм человека при половых контактах.

Также возможна его передача от больной матери к младенцу при родах. Зачастую его бывает довольно сложно диагностировать, так как хламидия имеет немалое сходство с вирусом.

Поэтому на помощь приходит такой анализ, как посев на хламидиоз.

При попадании в организм человека хламидии начинают очень быстро размножаться и проникать в клетки половой системы, изнутри оказывая на них разрушительное воздействие. Как правило, уже через 10 часов результат дает о себе знать.

Находясь в женском организме, хламидии в первую очередь поражают матку, а после этого — трубы и яичники. Пребывая в организме мужчины, они захватывают мочеполовую систему.

После того как бактерии покончат с главной своей целью, они переносятся в брюшную полость. Это касается как мужчин, так и женщин.

Посев на хламидии с определением чувствительности к антибиотикам — исследование, позволяющее вовремя диагностировать заболевание и не дать бактериям распространиться по организму. Какие есть показания к проведению данного исследования?

Диагностика хламидиоза: посев на хламидии, иммунофлюоресцентный методХламидиоз является инфекционным заболеванием, возбудителями которого являются Chlamidia trachomatis

  1. Имеющиеся в наличии симптомы хламидиоза.
  2. Бесплодие или эктопическая беременность.
  3. Положительный результат серологического анализа.
  4. Прошло 14 дней после завершения антибактериальной терапии.

При наличии любого из вышеперечисленных показаний человеку необходимо срочно сдать посев на хламидии. Какие у хламидиоза есть симптомы?

  1. Серо-желтые выделения с неприятным запахом.
  2. Боли в пояснице.
  3. Частые мочеиспускания, сопровождающиеся зудом и жжением.
  4. Повышенная температура тела, общая слабость, головная боль.

Как подготовиться и сдать посев на хламидии

Существует всего несколько разновидностей данного анализа. Перед тем как сдавать анализы, необходимо удостовериться, что состояние организма удовлетворяет следующим условиям:

  1. Перед исследованием не принимались местные лекарственные средства, не совершался половой акт.
  2. Не совершалось мочеиспускание на протяжении двух часов до взятия мазка.
  3. Отсутствует менструация у женщин при взятии биоматериала для исследования.

Бакпосев на хламидиоз могут назначить в любом медицинском учреждении города, будь то государственная или частная больница. Проводить его будут специалисты в лаборатории. Биологическим материалом для проведения анализа может послужить кровь, мокрота, моча или общий мазок. Для посева мочи на хламидии нужно взять стерильную емкость.

Важно помнить: несмотря на то, что данный вид диагностики считается наиболее точным из всех анализов на хламидиоз, 100%-ной гарантии его выявления он не дает.

Диагностика хламидиоза: посев на хламидии, иммунофлюоресцентный методБакпосев на хламидиоз могут назначить в любом медицинском учреждении города

Расшифровка результатов

Самый первый пункт результатов лабораторного анализа — наименование инфекции, которая была обнаружена при осмотре предоставленного биоматериала.

Следующий пункт — содержание данной инфекции в 1 мл вещества. Измеряется в КОЕ/мл. КОЕ — это колониеобразующая единица, означающая число бактерий, образующих колонии. Если получилось более 103 КОЕ/мл, значит, воспалительные процессы в организме пациента уже активизировались и начали свою разрушительную работу.

Далее идёт список антибиотиков, при помощи которых хламидии выводят из организма.

Буква «R», написанная рядом с названием антибактериального вещества, означает резистентность хламидийной бактерии по отношению к нему. Иными словами, подействовать на неё он неспособен.

Буква «S», напротив, указывает на восприимчивость бактерии к антибиотику. Помеченные таким образом лекарства можно назначать в качестве лечения хламидиоза.

Назначать какое бы то ни было лечение, основываясь на полученных результатах анализа, может только врач-специалист. В случае, если тест оказался положительным, в обязательном порядке назначаются дополнительные анализы.

Диагностика хламидиоза: посев на хламидии, иммунофлюоресцентный методПервым делом при выявлении хламидий нужно обратиться к венерологу

Что делать при выявлении хламидий

Первым делом при выявлении хламидий нужно обратиться к венерологу. Врач должным образом проконсультирует и назначит индивидуальное лечение.

Для большинства пациентов лечение хламидиоза является комплексной процедурой, включающей в себя несколько этапов.

Самый главный пункт лечения — это приём антибиотиков общего действия. Помимо общих, обычно нужно принимать ещё и местные антибактериальные средства. Также, в зависимости от состояния организма, врач может назначить иммуностимуляторы, антиоксиданты и витамины.

Если хламидии были обнаружены при беременности, появляется немалый риск заразить инфекцией будущего ребенка. В этом случае нужно быть особенно аккуратным при подборе препаратов для лечения хламидиоза.

Контроль излеченности стоит начинать не раньше, чем спустя 1 месяц после окончания лечения.

Видео

Посев на хламидии.

Источник: https://ozppp.com/hlamidioz/kak-delayut-posev-na-hlamidii.html

Хламидийная инфекция и методы её диагностики

Диагностика хламидиоза: посев на хламидии, иммунофлюоресцентный методРаспространенность воспалительных заболеваний мочеполовых органов у женщин, вызванных хламидиями, обусловливает актуальность проблемы хламидийной инфекции, особенно в отношении репродуктивного здоровья. По данным исследований последних лет, хламидийную инфекцию обнаруживают у 20-65% женщин детородного возраста с урогенитальными воспалительными заболеваниями инфекционной этиологии.  

В последние десятилетия, благодаря внедрению новых медицинских технологий, достигнуты значительные успехи в изучении биологии хламидий, в частности, сложного цикла их развития, который заключается в существовании двух основных форм микроорганизма — элементарных и ретикулярних телец. Вместе с тем, не выяснены механизмы, которые определяют особенности внутриклеточного паразитирования хламидий .

Согласно существующей номенклатуре, возбудители хламидийной инфекции относятся к семейству Chlamydiacea, рода Chlamydia. Выделены и идентифицированы 4 вида  хламидий: C. trаchomatis, C. pneumoniae, C. psittaci, C.pecorum.  Два первых вида являются возбудителями различных антропонозных, а C. psittaci — зооантропонозных заболеваний. Значение C.pecorum в патологии человека исследуется.

Указанные представители рода Chlamydia имеют один общий родоспецифичний антиген, который выявляют в реакции связывания комплемента (РСК), но отличаются видоспецифическими антителами, которые выявляют в реакции иммунофлуоресценции (РИФ). Эти антитела продуцируются к основному белку стенки клеток микроорганизма, что позволяет выделять среди каждого вида хламидий большое количество различных сероваров.

В частности, в виде C. trаchomatis существует три группы сероваров — возбудители трахомы А, В, Ва, С; возбудители урогенитального хламидиоза Д, Е, F, G, J, K и возбудители венерической лимфогранулемы — L1, L2, L3, в виде C.pneumoniae описаны штаммы TWAR и JOL207; в виде C. psittaci — 15 сероваров.

В последние десятилетия особое значение в эпидемиологическом аспекте приобрела урогенитальная хламидийная инфекция.

Источником инфекции являются пораженные хламидиями половые органы человека, которые являются естественной средой жизни этих патогенных микроорганизмов, которые размножаются в клетках столбчатого эпителия слизистой оболочки этих органов.

 Источником новых случаев заражения являются больные как с клинически выраженными, так и с бессимптомными вариантами течения хламидийной урогенитальной инфекции.

При этом, по данным некоторых авторов, у 70% женщин с выявленной хламидийной инфекцией клинических симптомов заболевания не было. Существенное значение в распространенности этой инфекции имеют не выявленные, не леченные или неадекватно леченные больные с острым, подострым или скрытым течением урогенитального хламидиоза, в частности, те, которые имеют многочисленные случаи половых отношений.

Распространенности заболевания способствует также высокая частота существования смешанных инфекций мочеполовой системы, что затрудняет диагностику и терапию.

Урогенитальный хламидиоз, как правило, передаётся половым путём. Внеполовой путь передачи (через загрязненные инфицированными выделениями руки, белье, общие полотенца, постель) наблюдают у детей, приводит к возникновению внутрисемейного хламидиоза. В связи с этим, некоторые авторы предложили термин «семейный хламидиоз».

Обоснованием введения этого термина является то, что во время обследования членов семьи возможно выделить хламидийное поражение в двух трёх поколениниях.

Это является важным фактором распространения хламидийной инфекции вследствие формирования семейных очагов и создает угрозу заражения, особенно детей.

Заражение детей хламидиями может также происходить внутриутробно, во время родов, при прохождении новорожденного через инфицированные родовые пути матери.

Существующие методы диагностики позволяют увеличить возможности обнаружения хламидийной инфекции по различным формам её клинического течения.

Культуральный метод

Наиболее специфическим методом диагностики является культивирование C. trachomatis в культуре клеток in vitro. Для этого применяются различные типы клеток, которые имеют высокую чувствительность к этим возбудителям: Mc Coy, Hela-229 и другие. Для выделения C. trаchomatis используют различные средства, которые стимулируют размножение микроорганизмов в клетках.

При бессимптомном течении клетки Mc Coy специально обрабатывают циклогексимидом или стабильным поликатионом, что способствует более полному выявлению возбудителей.

Вместе с тем, этот метод требует  соблюдения очень строгих методологических правил.

Ограничивают широкое применение этого метода также его сложность, относительно большая стоимость, возможность получения результата через 72 часа от начала проведения, высокая угроза заражения персонала.

Кроме того, диагностическая ценность культурального метода снижается при исследовании патологического материала от больных с хроническими формами инфекции, которым проводили длительные курсы лечения. Снижению диагностической ценности этого метода способствует также высокая частота смешанного (микст-хламидийного) поражения.

Цитологический метод

Цитологический метод позволяет выявить образованные хламидиями цитоплазматические включения при окраске препаратов по Романовскому-Гимза. Этот метод прост и доступен практически для каждой профильной лаборатории, однако чувствительность и специфичность его составляет всего 45%, что является недостаточным.

Иммунофлуоресцентный метод

Иммунофлуоресцентный анализ — совокупность иммунохимических методик с применением иммунореагентов, в состав которых введены флуоресцентные метки флуоресцеин-изотиоцианатом (ФИТЦ). Различают два варианта иммунофлуоресценции — прямую и непрямую.

В первом варианте иммунная антихламидийная сыворотка имеет флуоресцентную метку, во втором — без такой отметки, однако, добавляется сыворотка, меченая флуорохромом, и имеет антитела к антихламидийной сыворотке. Эти методики являются основными в диагностике хламидиоза.

Они позволяют выявить до 85% случаев хламидийной инфекции.

Вместе с тем, при применении этого метода могут регистрироваться ложноотрицательные результаты, что обусловлено недостаточным количеством эпителиальных клеток в пробе, и ложноположительные при наличии у некоторых бактерий перекрестно реагирующих антигенов, которые могут реагировать с антителами к хламидиям.

Преимуществами метода является скорость проведения, достаточно высокая точность, непосредственное определение антигена возбудителя. К недостаткам иммунофлуоресцентного метода относятся: необходимость иметь люминесцентный микроскоп, субъективная интерпретация результатов, сложность одновременной обработки большого количества образцов.

Серодиагностика

Определение хламидийных антител (серодиагностика) имеет вспомогательное значение, обусловленное слабой иммуногенностью возбудителя.

Серологические показатели без параллельного бактериологического исследования могут быть диагностически достоверными только в двух случаях: 1) при обнаружении антител классов IgA или IgM, что отмечают примерно в 30-40% наблюдений, 2) при сероконверсии, когда наблюдается чёткое увеличение титра антител класса IgG в сыворотках в 2-4 раза от начального уровня, учитывая то, что однократное выявление антител к хламидиям может быть связано не только с существующей в настоящее время, но и с перенесённой ранее хламидийной инфекцией.

ИФА

Достаточно распространено в лабораторной практике определение антител к хламидиям с помощью иммуноферментного анализа (ИФА).

Метод основан на выявлении комплекса антиген-антитело с помощью активности ферментной метки, ковалентно связанной с антигеном.

У больных с выраженными клиническими проявлениями чувствительность метода составляет 80-96%, при бессимптомном течении заболевания — 40-50%.

Возможность получения ложноположительных или ложноотрицательных результатов обусловлена теми же причинами, что и при проведении ИФА. Недостатками иммуноферментных тест-систем является то, что их специфичность и чувствительность зависят от их качества. К достоинствам метода относится возможность анализа крупной партии образцов при автоматизации процесса.

РНИФ

Реакция непрямой иммунофлуоресценции (РНИФ) основана на том, что на предметные стекла с предварительно нанесенными антигенами хламидий наносят исследуемую  сыворотку больных, а после инкубации — сыворотку, меченную флуорохромом.

Читайте также:  Вульвит у ребенка: симптомы, лечение, правила ухода

Комплекс антиген-антитело выявляется по специфическому свечению во время люминесцентной микроскопии. Преимуществом метода является то, что он позволяет осуществлять не только видоспецифическую, но и внутривидовую диагностику.

Недостатки метода аналогичны таковым другим флуоресцентным методам.

РСК

С помощью реакции связывания комплемента (РСК) можно выявлять хламидийные антитела к родоспецифическому липополисахаридному (ЛПС) антигену.

При урогенитальном хламидиозе результат считают положительным при определении сероконверсии или если титр антител превышает 1:64.

Недостатками метода являются родоспецифичность и более низкая чувствительность по сравнению с другими серологическими методами, а также невозможность определения различных классов антител.

ПЦР

В последнее десятилетие проходят клиническую апробацию некоторые молекулярно-генетические методы диагностики хламидиоза, направленные на определение ДНК возбудителя в исследуемом материале.

Наиболее широко внедрен в практику метод полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Основу метода составляют направленные олигонуклеотидами циклы синтеза ДНК, которые вызывают репликацию in vitro нуклеотидных последовательностей мишени.

Основными преимуществами метода ПЦР являются: высокая чувствительность и специфичность, неинвазивность и простота забора проб, простые требования к условиям транспортировки и хранения, возможность скрининга больших популяций, автоматизация процесса, скорость получения результатов. Метод применяют как при исследовании цервикальных и уретральных соскобов, так и осадка мочи.

Использование мочи в качестве исследуемого материала является неинвазивным методом диагностики, что значительно упрощает обследование. В настоящее время метод ПЦР является наиболее чувствительным методом диагностики урогенитальной хламидийной инфекции.

Источник: http://infection-net.ru/diagnostika/hlamidiynaya-infektsiya-i-metodyi-eyo-diagnostiki

Посев на хламидии: где сдать, особенности анализа

Посев на хламидии, где сдать? Этот вопрос приходится решать тем, кто хочет удостовериться в своем полном сексуальном здоровье. Почему эту сложную процедуру проводят не в каждой лаборатории?

Раннее обнаружение хламидиоза дает возможность предотвратить дальнейшее распространение инфекции, избежать заражения партнера, уменьшает риск появления бесплодия и злокачественных новообразований. Одним из самых эффективных методов диагностики половых инфекций считается бакпосев.

Где сдать посев на хламидии?

Найти место, где делают бак-посев на хламидии, непросто даже в крупных городах. Посев уже не считается ведущим методом диагностики бактериальных инфекций.

Сейчас хламидиоз диагностируют в основном способом полимеразной цепной реакции – это дешевле, быстрее и лишь немногим уступает посеву в точности.

В то же время бакпосев – наиболее точный метод определения длительной и вялотекущей хламидийной инфекции, позволяющий дополнительно определять чувствительность паразитов к тем или иным антибиотикам.

Поэтому в некоторых случаях врач рекомендует именно этот анализ.

Если в рекламном проспекте или на сайте медицинского учреждения указано, что там берут мазок на хламидиоз, это не значит, что будет сделан именно посев. Мазок могут брать для других исследований: ПЦР, цитоскопии, прямой и непрямой иммунофлюоресценции.

Особенность исследования

Обзванивая лаборатории нужно иметь в виду, что посев не делают именно на хламидиоз. Содержимое цервикального канала или уретры высевают в чашку Петри на питательную среду и помещают в термошкаф, где поддерживается постоянная положительная температура.

В таких условиях вырастут любые бактерии, которые есть в биоматериале. Если в нем есть хламидии – они прорастут и образуют колонии. Если инфекция вызвана другим возбудителем, колониеобразующиим организмом станет он.

Широкий ассортимент микробиологических исследований предлагает лаборатория Гемотест, Ее филиалы есть во всех регионах. Стоимость посева в 2019 году составляет от тысячи до полутора тысяч рублей.

  Все методы выявления эхинококкоза у человекаНе разобрался в материале статьи или нужна помощь? Задай вопрос сейчас и получи на него ответ.

Исследование называется «Посев на аэробную и факультативно-анаэробную бактериальную флору с определением чувствительности к расширенному спектру антимикробных препаратов».

На исследование берется:

  • эякулят;
  • секрет предстательной железы;
  • отделяемое из влагалища, уретры или цервикального канала.

В памятке лаборатории есть программа подготовки пациента к забору материала:

  • женщины должны прийти в лабораторию вне менструации;
  • забор материала из уретры проводится через 3 часа после последнего мочеиспускания;
  • для взятия секрета простаты пациент должен тщательно вымыть головку полового члена водой с мылом.

Если в биоматериале есть бактерии, при помещении на питательную среду, способствующую развитию микроорганизмов, они начнут размножаться и образовывать массовые скопления, видимые невооруженным глазом как налет на поверхности.

По цвету, размеру и форме колоний специалисты определяют, какие именно бактерии присутствуют в биоматериале. Дополнительно проводится микроскопирование.

Посев на хламидии долгое время считался золотым стандартом. Он на 100 % позволял выявить возбудителя воспаления, проверить его реакцию на различные антибиотики и выбрать правильную тактику лечения.

Имея на руках результаты такого исследования, врач может назначить максимально адекватную терапию. Исследование позволяет обнаружить условно-патогенные и патогенные бактерии: энтеробактерии, энтерококки, стрептококки, стафилококки, хламидии, гонококки, трихомонады и любые другие микроорганизмы.

Виды анализов на хламидиоз

  • Все методы диагностики хламидиоза можно условно разделить на прямые и непрямые.
  • Прямые методы исследуют биоматериал, собранный с помощью инвазивных процедур: забора крови, мочи, соскобов, мазков.
  • Прямые методы:
  • посев;
  • цитология мазков;
  • реакция прямой иммунофлюоресценции;
  • ПИФ;
  • серология;
  • экспресс-диагностика;
  • ПЦР.

Непрямые методы направлены на поиск не самих бактерий, а следов их пребывания в организме.

Известно, что хламидии могут распространяться по организму и оседать в различных органах и тканях, сохраняясь там длительное время. Это приводит к хроническому хламидиозу. Когда ослабляется иммунитет, из пораженных клеток происходит высвобождение антигенов хламидий. В ответ в сыворотке крови накапливаются специфические антитела. Их можно обнаружить с помощью исследований:

  Что такое дизгруппа бактерий и как ее обнаружить?Непрямые методы высокоточные, позволяют избежать ложноотрицательных результатов. С их помощью можно диагностировать инфекцию, скрыто протекающую в организме на протяжении многих лет. Особенно часто исследование крови на антитела проводят у детей, так как у них сложно взять материал для прямого исследования.

Исследования, доступные в лабораториях

Доктор медицинских наук, профессор Гандельман Г. Ш.:

Занимаюсь обнаружением и лечением паразитов уже много лет. С уверенностью могу сказать, что паразитами заражены практически все. Просто большинство из них крайне трудно обнаружимы. Они могут быть где угодно — в крови, кишечнике, легких, сердце, мозге. Паразиты в буквальном смысле пожирают вас изнутри, заодно отравляя организм. В итоге, появляются многочисленные проблемы со здоровьем, сокращающие жизнь на 15-25 лет.

Основная ошибка — затягивание! Чем раньше начать выводить паразитов, тем лучше. Если же говорить о лекарствах, то тут всё проблематично.

На сегодняшний день существует только один действительно эффективный антипаразитный комплекс, это . Он уничтожает и выметает из организма всех известных паразитов — от головного мозга и сердца до печени и кишечника.

На такое не способен больше ни один из существующих сегодня препаратов.

В рамках Федеральной программы, при подаче заявки до 12 октября. (включительно) каждый житель РФ и СНГ может получить одну упаковку Toximin БЕСПЛАТНО!

Сейчас пациентам чаще других назначают два исследования на хламидиоз: ИФА и ПЦР. Они достаточно точны, проводятся быстро, недороги.

ИФА – современный высокоточный метод, позволяющий диагностировать хламидиоз с достоверностью более 60 %. Он дает возможность не только выявить возбудителя, но и определить, в какой форме протекает болезнь – хронической, острой или в виде носительства. ИФА часто назначают при выявлении причин мужского бесплодия.

  Самый лучший анализ на хламидии

ПЦР на хламидиоз делают бесплатно в кожно-венерологическом диспансере по месту жительства. Можно сдать анализ и в коммерческих медучреждениях.

Мазок для ПЦР на хламидии в лаборатории Гемотест обойдется в 240 рублей. За эту небольшую сумму пациент пройдет современную качественную диагностику.

Потребуется сдать:

В заключении укажут:

  • «Обнаружено» – означает, что образец исследованного материала инфицирован хламидиями;
  • «Не обнаружено» – в материале отсутствуют ДНК хламидий.

В крупных лабораториях способом ПЦР выявляют ДНК хламидий в самых разных биоматериалах:

  • спинномозговой жидкости;
  • секрете простаты;
  • эякуляте;
  • соскобе эпителиальных клеток урогенитального тракта;
  • синовиальной жидкости;
  • соскобе из ротоглотки;
  • соскобе со слизистой прямой кишки;
  • соскобе с конъюнктивы;
  • лимфе.

Мнение практикующего акушера-гинеколога и известного исследователя Елены Березовской о бакпосевах в гинекологии:

За дополнительную плату специалист может выехать на дом, взять материал и транспортировать его в лабораторию.

В некоторых лабораториях получить результат анализов можно уже через несколько часов после сдачи биоматериала. Но чаще ожидать результатов исследований приходится несколько рабочих дней.

Доходчиво о бакпосеве из уст Евгения Комаровского:

Диагностика хламидиоза сложна. Это связано с особенностями развития и местообитания хламидий. Ни один метод, даже такой надежный и проверенный как бак-посев, не гарантирует отсутствие ложноотрицательных результатов. Поэтому сейчас назначают сразу несколько тестов. Исследование одновременно двух или трех видов биоматериала разными способами повышает достоверность диагностики.

Источник: http://otparazitoff.ru/hlamidioz/gde-sdat-posev.html

Лабораторная диагностика хламидиозов

Для диагностики
хламидиозов используются методы,
направленные на выявление возбудителя
или его антигенов
или же антихламидийных антител.

Таблица. Методы
лабораторной диагностики хламидиозов.

Методы Цель Используемые тесты
Морфологические Выявление морфологических структур возбудителя Окраска препаратов по Романовскому – Гимзе, раствором Люголя и др. Иммунофлюоресцентный анализ (ИФА прямой и непрямой).
Культуральные Выделение возбудителя
  • Культура клеток
  • Нужные эмбрионы
  • Лабораторные животные
Иммунологические Выявление • антигена и• антитела МФА прямой, ИФА и др.РСК, МФА прямой, ИФА и др.
Молекулярно- биологические ДНК диагностика Гибридизация, амплификационные тест – системы (ПЦР, ЛЦР и др.)

Выбор того или
другого метода, прежде всего, зависит
от возможности лаборатории и характера
процесса. Более достоверные ответы
можно получить при одновременном
использовании нескольких методов.

Забор материала

Материалом для
исследования при урогенитальном
хламидиозе являются мазки, соскобы со
слизистой оболочки уретры, цервикального
канала, шейки матки, прямой кишки,
конъюктивы и т. п., которые забирают
ложечкой Фолькмана, тампоном, платиновой
петлёй или специальными щёточками. Для
исследования можно также использовать
сперму, сок простаты.

Забор материала
проводится до лечения антибиотиками.
Перед взятием материала из мочеполового
тракта больные не должны мочиться 1 –
1,5 часа.

*
Морфологические
(цитологические) методы

основаны на выявлении включений хламидий
при использовании различных методов
окраски. До недавнего времени наиболее
распространёнными методами были окраска
по Романовскому – Гимзе и раствором
Люголя.

При окраске по
Романовскому
– Гимзе

цитоплазматические включения видны
как округлые или полулунной формы
структуры красно – фиолетового цвета
(ЭТ) или сине – фиолетового цвета РТ.

При окраске раствором
Люголя

включения красно – коричневого цвета
в клетках, окрашенных в жёлтый цвет.

В
последнем случае препараты легче
просматривать, но чувствительность
этого метода невысокая – 25 – 30 %, а по
некоторым данным – 5 – 15 %, как впрочем,
и при окраске по Романовскому – Гимзе
в случае урогенитального хламидиоза.
При конъюктивите чувствительность
несколько выше 30 – 60 %.

Несмотря на простоту
метода, на просмотр препарата уходит
36 – 40 минут, и метод не применим для
скрининга. Кроме того, возможно обнаружение
псевдовключений.

Более высокой
чувствительностью (90 – 95 %) и специфичностью
до 98 % обладает иммунофлюоресцентный
анализ, который приказом МЗ РФ
регламентирован для постановки диагноза
хламидиоза.

Используют как
прямую РИФ,
так и непрямую. При прямой РИФ используются
моноклональные антитела, меченные
флюоресцирующим изотиоционатом против
главного белка внешней мембраны хламидий,
имеющегося во всех 15 известных сероварах
C.
trachomatis.
В люминисцентном микроскопе ЭТ и РТ
видны как ярко – зелёные на красно –
коричневом фоне окрашенных клеток.
Оценка проводится по 50 клеткам.

Читайте также:  Операции по поводу недержания мочи - показания и виды

*
Культуральные методы

Для исследования
можно использовать различные культуры:
Hela
L
– 929, культуру 21 из клеток почек хомячков,
но, по мнению большинства исследователей,
лучшей является культура клеток Мак –
Коя (Mc
Coy).

Культуральные
методы являются достаточно дорогостоящими,
требуют от персонала специальных знаний,
а также особого оборудования и занимают
много времени. Достоинством является
высокая чувствительность и 100 %
специфичность.

*
Иммунологические методы

Наряду с прямой
реакцией иммунофлюоресценции для
выявления антигена используется ИФА.
Твердофазный ИФА на основе моноклональных
антител основан на наличии у хламидий
термостабильного родоспецифического
(LPS)
антигена. Чувствительность метода –
80 – 95 %, специфичность – 90 %.

Также используется
иммуноэнзимный метод (ELJSA).
При этом используется Ат, конъюгированные
с ферментом (пероксидаза хрена, щелочная
фосфотаза и др.).

  1. *
    Молекулярно – биологические методы:
  2. а) основаны на
    выявлении хламидийной ДНК (РНК) в образцах
    путём гибридизации нуклеиновых кислот с использованием ДНК – зонда, меченного
    биотином;
  3. б) в последние годы
    широко используется ПЦР (PCR)
    и лигазная цепная реакция – ЛЦР (LCR).

Урогенитальный
хламидиоз нередко протекает с осложнениями,
при которых возбудитель недоступен.
Поэтому используются серологические
реакции для выявления Ат: РСК, РНГА,
реакция радиоиммунопреципитации (РИА),
иммунофлюоресценция (МФА – JFA),
иммунопероксидазные методы (ИПА – JPA),
иммуноферментный анализ (ИФА – EJA/
ЕLJSA),
микроиммунофлюоресценция (МИФ).

  • Микоплазмы
  • Микоплазмы
    – группа антропонозных инфекционных
    болезней, вызываемых микоплазмами,
    характеризуются поражением органов
    дыхания и мочеполовых органов.
  • Таксономия:
  • Класс: Mollicutes
    («мягкокожие»)
  • Порядок: Mycoplasmatales
  • Семейство: Mycoplasmataсeae
  • Род: Mycoplasma
    (включает ≈ 100 видов)
  • Ureapеasma
    (насчитывает 3 вида)
  • Виды (патогенные для человека):
  • — M. pneumoniae
  • — M. hominis
  • — M. genitalium
  • — Ureaplasma
    urealyticum

Первые патогенные
микоплазмы были выделены Нокаром, Ру,
Бореллем (1893 – 1898 гг.) от животных. Полное
морфологическое описание возбудителя
проведено Борде (1910) и Бореллем (1910), М.
Г. Тарковский и Е. П. Джунковский позднее
разработали методы их культивирования.

Первые патогенные для человека микоплазмы были выделены
из абсцесса бартолиновых желёз Диенесом
и Эдзаллом (1937), а также Итоном от больного
атипичной пневмонией (1944 – агент Итона).
Только в 1962 г. микроб был отнесён к
микоплазмам и окончательно установлена
его роль как возбудителя пневмонии.

Морфология:

Это мелкие (0,1 –
1,2 мкм), проходящие плеоморфные, через
бактериальные фильтры микроорганизмы,
которые могут образовывать коковидные,
ветвящиеся, многоядерные формы, лишённые
истинной клеточной стенки и не способные
синтезировать её компоненты.

Функции
клеточной стенки выполняет трёхслойная
цитоплазматическая мембрана.
Грамотрицательные, как правило,
неподвижные микроорганизмы. Содержат
в своём составе ДНК и РНК. Геном микоплазм
отличают меньшие размеры.

Обычно
размножаются бинарным делением, также
способны к почкованию и фрагментации.

Культуральные
свойства.
Это
факультативные анаэробы. Микроорганизмы
могут культивироваться на а) искусственных
питательных средах, но прихотливы к
условиям культивирования; в питательные
среды (на переваре Хоттингера) добавляют
нативную сыворотку, холестерин,
нуклеиновые кислоты, углеводы, витамины
и различные соли.

Чувствительны к
микроэлементному составу среды –
высокое содержание Zn2+,
Mg2+,
Co2+,
Fe2+
может ингибировать рост. Микроорганизмы
растут при температуре 22 – 41 °
С (оптимальная 36 – 37 °
С), оптимум pH
6,8 – 7,4; растут медленно 5 – 7 суток. На
твёрдых средах образуют характерные
мелкие колонии (0,2 – 1,5 мм) с более тёмным
и зернистым центром типа «яичницы
глазуньи».

На средах, содержащих кровь,
дают α – и β – гемолиз.

  1. На полужидких
    средах растут по уколу.
  2. На жидких средах
    дают незначительное помутнение, некоторые
    штаммы дают плёнку и придонный рост.
  3. б) для культивирования
    можно использовать куриные эмбрионы,
    гибель которых наблюдается с 3 – 5
    пассажа.
  4. в) также используют
    культуру клеток.
  5. Биохимические
    свойства
    микоплазм разнообразны. Выделяют 2
    группы:
  1. «истинные» микоплазмы разлагают с образованием кислоты глюкозу, мальтозу, маннозу, фруктозу, крахмал, гликоген;

  2. восстанавливающие соединения тетразолия, окисляющие глумат и лактат, но не ферментирующие углеводы.

Все виды не
гидролизуют мочевину и эскулин.

Антигенная
структура:

Сложная, имеются
видовые антигены, представленные
липидами, полисахаридами, белками. Для
микоплазм характерен выраженный
антигенный полиморфизм.

  • Факторы
    патогенности
    :
  • — экзотоксины
    (например, нейротоксин у M.
    pneumoniae)
  • — эндотоксины
  • — гемолизины
  • — ферменты
    патогенности: фосфолипаза, аминопептидаза,
    нейраминидаза, протеазы
  • — адгезины в составе
    поверхностных антигенов.

Устойчивость:
мало устойчивы во внешней среде,
чувствительны к высокой температуре
(45 °
— 15 минут), к высушиванию, УФО, дез.
растворам. Из антибиотиков чувствительны
к макролидам, тетрациклинам, левомицетинам,
аминогликозидам.

Устойчивы к низкой
температуре, из антибиотиков – к
пеннициллинам. Широко распространены
в природе, в почве, в воде, организме
человека и животных.

Роль в патологии

M.
Pneumoniae
один из
основных возбудителей лёгочных поражений,
вызывает до 20 % всех пневмоний; в РФ в
различные годы респираторный микоплазмоз
занимал 4 – 6 место среди прочих
возбудителей ОРЗ.

Источник инфекции
– больной или носитель.

Основной путь
передачи

– воздушно – капельный.

Восприимчивость
зависит от иммуногенетических особенностей
организма. Чаще всего вспышки инфекции
возникают при формировании новых
коллективов (например, в воинских
частях). Заболевание выше в холодный
период времени.

Патогенез.


Возбудитель фиксируется на мембране
клеток мерцательного эпителия бронхов,
нарушает их структуру (липидные компоненты
мембраны микоплазм диффундируют в
клеточную мембрану, а стеролы клетки
поступают в мембрану микоплазм).

После
проникновения в клетку микоплазмы
размножаются в их цитоплазме, образуя
микроколонии. Цитотоксическое действие
микоплазм обусловлено продукцией
перекисей, разрушающих липидные
мембранные комплексы, что приводит к
гибели клеток.

В патологический
процесс вовлекаются межальвеолярные
перегородки. Возможна гематогенная
диссеминация возбудителя с поражением
печени, почек, центральной нервной
системы. В патогенезе бронхита и пневмонии существенное значение имеют вторичная
бактериальная флора, а в других органных
поражениях – аутоиммунные реакции.

  1. Иммунитет:
    Формируется
    клеточный и гуморальный иммунный ответ.
  2. Продолжительность
    постинфекционного иммунитета зависит
    от интенсивности заболевания от 1 года
    до 10 лет.
  3. Инкубационный
    период от 4 до 25 суток, чаще 7 – 14 дней.
  4. Клинически различают 2 формы болезни:

  5. острое респираторное заболевание (ОРЗ)

  6. пневмония

Специальная
профилактика
— не разработана. Необходима изоляция
больных из коллектива.

Для лечения
используются антибиотики тетрациклинового
ряда и макролиды (эритромицин, азитромицин).

M.
hominisвходит в
группу урогенитальных микоплазм, также
включающую M. genitalium,
M.
fermentans.

Основной путь
передачи

– половой. Возможно заражение
новорождённых, которые инфицируютя при
прохождении родовых путей.

M.
hominis
преимущественно инфицирует органы
мочеполовой системы, вызывая деструктивно
– воспалительные процессы с выраженными
микроциркуляторными нарушениями.

У
мужчин вызывает уретриты и простатиты,
у женщин – уретриты, цервициты,
воспалительные поражения тазовых
органов.

Особую опасность представляет
урогенитальный микоплазмоз беременных, так как он может стать причиной
невынашивания беременности, преждевременных
родов, внутриутробного заражения плода
и привести к развитию послеродового
сепсиса.

M.
fermentans.
Несмотря на то, что вид был выделен ещёв
1950 г., многие из его свойств остаются
неизученными.

1. Наиболее часто
возбудитель выделяется от ВИЧ —
инфицированных пациентов (70 %).

2. Играет роль в
развитии урогенитальных заболеваний.

3. Доказана его роль
в развитии хронического пиелонефрита.

4. Возбудитель
выделяют у 45 % больных ревматоидным
артритом. Патогенез суставных поражений
во многом связан со способностью
микоплазм запускать аутоиммунные
процессы, а также длительно персестировать в организме и аккомулироваться в
суставных хрящах и костном мозге.

Ureaplasmaurealiticum

(urea
– мочевина, plasma
– принимающий любую форму).

Впервые выделена
в 1954 г. от больного уретритом (Шепард).

  • Морфология:
    В настоящее время выделяют 3 основных
    типа микроорганизмов:
  • — малые (мелкие)
    (120 – 150 нм) с гомогенной цитоплазмой и
  • множеством рибосом;
  • — средние (500 –
    750 нм) с рибосомами по периферии;
  • — крупные, с
    негомогенной цитоплазмой и выраженным
  • нуклеоидом.
  • Культуральные
    свойства

сходны с микоплазмами.
Отличается быстрым ростом при
культивировании в атмосфере газовых
смесей, содержащих 5 % СО22
и 95 % № 2
2, либо 5 % О22, 10 % СО2
и 85 % № 2.
На жидких средах растёт скудно. Микроаэрофилы.

  1. Биохимический
    свойства
  2. Уреаплазмы инертны
    к сахарам, каталаза – отрицательны,
    гидролизуют мочевину до аммиака, то
    есть характерна уреазная активность.
  3. Отличительная
    особенность метаболизма – способность
    продуцировать насыщенные и ненасыщенные
    жирные кислоты.

Антигенная
структура

сложная. В настоящее время выделяют 16
сероваров, разделённых на 2 группы (А и
В). Основные антигенные детерминанты –
поверхностные полипептиды.

Факторы патогенности. Обладает протеазной активностью,
направленной

на Jg А человека. Продуцирует фосфолипазу,
связанную с простагландинами
эукариотических клеток. Видимо, данный
фактор имеет отношение к преждевременным
родам.

  • Эпидемиология:
  • Источник
    – больные лица.
  • Путь передачи
    – половой.
  • Вызывает
    заболевания:
    негонококковые
    уретриты (50 % у мужчин), уреаплазменные
    простатиты, доказана роль в развитии
    мочекаменной болезни, у женщин –
    воспалительные заболевания органов
    малого таза, бесплодие.
  • Патогенез:

Механизм патогенеза
урогенитальных микоплазмозов до конца не выяснен. Имеются лишь отдельные
сведения о взаимодействии микоплазм с
клетками.

  1. Персистенция уреаплазм на мембране, однако пока не установлено, являются ли они мембранными паразитами или проникают в цитоплазму.

  2. Продукты жизнедеятельности уриоплазм токсичны для клеток организма и оказывают повреждающее действие на клеточную стенку. Окисление жиров в результате активности пероксидазы также способно привести к повреждению клеточной стенки.

  3. Токсичной для организма может быть концентрация аммиака, образующаяся в результате расщепления мочевины.

  4. Уреаплазмы утилизируют компоненты клетки хозяина, такие как холестерин и жирные кислоты.

  1. Лабораторная
    диагностика.
  2. Особенности
    метаболизма уреаплазм позволяют легко
    дифференцировать их от прочих микоплазм
    по способности секретировать уреазу
    (метод определения уреазной активности).
  3. Лабораторная
    диагностика микоплазм и уреаплазм
  4. Используют методы:
  1. бактериологический (культуральный)

  • В настоящее время
    используются специальные тест – системы
    «Mycoplasma
    ДИО» (фран.), «Mycoplasma
    JST»;
  • 2) серологические
    методы:
  • а) РСК, РПГА, РИМ,
    ИФА – для выявления антител;
  • б) определение
    антигена – РАГА (реакция
    агрегатгемагглютинации), ИФА, РИФ;
  • 3) метод активированных
    частиц;
  • 4) метод генных
    зондов;
  • 5) ПЦР;

Источник: https://studfile.net/preview/4666662/page:6/

Посев на Chlamydia trachomatis с определением чувствительности к антибиотикам

[10-006] Посев на Chlamydia trachomatis с определением чувствительности к антибиотикам

2465 руб.

  • Это микробиологическое исследование, позволяющее выявить в исследуемом биоматериале возбудителя хламидийной инфекции – Chlamydia trachomatis – и определить его чувствительность к антибиотикам.
  • Синонимы русские
  • Посев на хламидиоз с определением титра и чувствительности к антибиотикам.
  • Синонимы английские
  • Chlamydia trachomatis culture, bacteria identification and susceptibility.
  • Метод исследования
  • Микробиологический метод.
  • Какой биоматериал можно использовать для исследования?
  • Мазок урогенитальный, эякулят, секрет простаты, мазок с конъюнктивы, мазок из десневого кармана.
  • Как правильно подготовиться к исследованию?
  • Женщинам рекомендуется сдавать урогенитальный мазок до менструации или через 2-3 дня после ее окончания.
  • Мужчинам не следует мочиться в течение 3 часов до сдачи урогенитального мазка.
  • Не рекомендуется проводить туалет полости рта в день взятия биоматериала на исследование.

Общая информация об исследовании

Chlamydia trachomatis – это внутриклеточные паразиты, затрагивающие главным образом мочеполовую систему. Источник инфекции – больной хламидиозом или бессимптомный носитель. В основном она передается половым путем, но возможен и вертикальный путь – от больной матери к ребенку во время родов.

Chlamydia trachomatis поражает преимущественно слизистые оболочки и является причиной трахомы, паховой лимфогранулемы, а также многих других заболеваний.

У мужчин Chlamydia trachomatis вызывает негонорейный уретрит, эпидидимит, простатит, конъюнктивит, атипичную пневмонию, реактивные артриты и бесплодие, у женщин – уретриты, цервициты, сальпингиты, эндометриты, конъюнктивиты, атипичную пневмонию, реактивный артрит, бесплодие, внематочную беременность, а также акушерские патологии – преждевременное отхождение околоплодных вод и преждевременные роды. У новорождённых Chlamydia trachomatis приводит к развитию конъюнктивита и атипичной пневмонии.

Читайте также:  Гематурия - что это такое, какие причины и как лечить?

Нередко встречается хроническая бессимптомная инфекция и реинфекция, которые могут играть важную роль в иммунопатологических реакциях, вызывающих слепоту при трахоме и фиброз верхних отделов мочевыводящей системы, кроме того, такие инфекции способствуют воспалительным заболеваниям таза, бесплодию, внематочной беременности и пневмонии у детей.

Одним из методов выявления Chlamydia trachomatis и единственным методом определения их чувствительности к антибиотикам является культивирование на питательных средах (посев). Кроме того, это наиболее надежный способ подтвердить диагноз «паховая лимфогранулема».

Для чего используется исследование?

  • Чтобы установить причину воспалительных заболеваний мочеполовой системы.
  • Чтобы установить причину кератоконъюнктивита.
  • Чтобы выбрать рациональную антибактериальную терапию и оценить ее эффективность.
  • Для дифференциальной диагностики (наряду с другими исследованиями) заболеваний, протекающих со сходными симптомами, таких как гонорея, микоплазменная, уреаплазменная инфекция.

Когда назначается исследование?

  • При подозрении на хламидийную инфекцию, в том числе паховую лимфогранулему, трахому.
  • При бесплодии или внематочной беременности.
  • При положительных результатах серологического исследования на Chlamydia trachomatis.
  • После завершения антибактериальной терапии (не ранее чем через 14 дней после отмены препарата).
  1. Что означают результаты?
  2. Референсные значения: отрицательно.
  3. Причины положительного результата
  4. Причины отрицательного результата
  • Отсутствие хламидийной инфекции.
  • Что может влиять на результат?
  • Предшествующая антибактериальная терапия.
  • Также рекомендуется
  • Кто назначает исследование?
  • Гинеколог, уролог, венеролог, офтальмолог, педиатр, ревматолог.
  • Литература



  • Лифшиц В.М. Лабораторные тесты при заболеваниях человека : справочник для врачей / В.М. Лифшиц, В.Я. Сидельникова. – М. : “Триада-Х”, 2003. – 352 с.
  • Энциклопедия клинических лабораторных тестов / перевод с англ. под ред. В.В. Меньшикова. – М. : Изд-во “Лабинформ”, 1997. – 960 с.
  • Stamm W.E., Jones R.B., Batteiger B.E. Introduction to chlamydial diseases ; Stamm W.E., Jones R.B., Batteiger B.E. Chlamydia trachomatis (trachoma, perinatal infections, lymphogranuloma venereum, and other genital infections). In: Principles and practice of infectious disease / G.L. Mandell, Bennett J.E., Dolin R (Eds) ; 6th ed. – Churchill Livingstone, Philadelphia, PA 2005. – 2701 p.
  • Chlamydia trachomatis infection. In: Oxford handbook of genitourinary medicine, HIV, and Aids / R. Pattman [et al.] (Eds) ; 1st edition. – USA : Oxford University Press, 2005. – 580 p.

Источник: https://helix.ru/kb/item/10-006

Лабораторная диагностика хламидийной инфекции

по разным данным, от 5 до 15 % молодых сексуально активных людей поражены хламидийной инфекцией.

ВВЕДЕНИЕ

Хламидии (Chlamydia) — мелкие грамотрицательные кокковидные бактерии размером 250-1500 нм (0,25-1 мкм). Они имеют все основные признаки бактерий: содержат два типа нуклеиновых кислот (ДНК и РНК), рибосомы, мурамовую кислоту (компонент клеточной стенки грамотрицательных бактерий), размножаются бинарным делением и чувствительны к некоторым антибиотикам.

Семейство Chlamydiaceae (входящее в порядок Chlamydiales) является облигатными внутриклеточными бактериями, которые имеют две формы жизни (элементарные и ретикулярные тельца), сходный двухфазный цикл развития (состоящий из чередования различных форм — элементарного тельца и ретикулярного тельца), обладают склонностью к персистенции (или к латентному (скрытому) существованию).

Согласно новой международной классификации имеется четыре семейства и 5 родов хламидий. В каждом роде представлено от одного до шести видов, отличающихся между собой по ряду фенотипических признаков. Каждый вид имеет не только свое место в классификации, но также имеет свои патогенные потенции, требующие особого терапевтического подхода.

Рассмотрим наиболее значимые (патогенные) для человека виды хламидий (не погружаясь в эту тонкую и сложную классификацию).

(1) Chlamydia psittaci: вызывает у человека атипичную пневмонию, энцефаломиокардит, артрит, пиелонефрит, энцефаломиокардит (эта хламидия является абсолютным зоонозом, то есть, инфекция передается человеку от животного; пути передачи воздушно-капельный и воздушно-пылевой).

(2) Chlamydia pneumonia (абсолютный антропоноз — передается человеку исключительно от больного или инфицированного человека, заражение человека происходит воздушно-капельным путем и воздушно-пылевым путем): вызывает у взрослых острые респираторные заболевания, в частности бронхиты и мягкую форму пневмонии, имеющих тенденцию к хронизации процесса.

(3) Chlamydia trachomatis (в ней выявлены 18 антигенных серотипов): встречается только у человека и вызывает широчайший спектр болезней, включая урогенитальные заболевания, конъюнктивиты, некоторые формы артритов (серотипы хламидий, вызывающие поражение урогенитального тракта передаются от человека к человеку при половом контакте).

Особенностью хламидий является то, что они развиваются только в эпителии особого типа, в так называемом призматическом (цилиндрическом) эпителии, поэтому поражаются органы, покрытые этим эпителием.

Chlamydia pneumonia и Chlamydia psittaci, поражая эпителий дыхательных путей, прежде всего бронхов, вызывают хронические, реже острые, бронхиты и пневмонии («воспаление лёгких»).

Chlamydia trachomatis же, повреждая слизистую оболочку уретры, канала шейки матки, маточных труб приводит не только к острым воспалительным процессам, но и к хронизации с последующими осложнениями, наиболее грозным из которых является бесплодие

Многочисленные клинико-эпидемиологические исследования свидетельствуют о широком распространении хламидийной инфекции.

Сегодня хламидийная инфекция прочно заняла второе место после пневмококка в спектре возбудителей пневмоний, которые нередко имеют тенденцию к хронизации и тяжелому течению с летальными исходами.

50–80% случаев нарушения репродуктивной функции у женщин обусловлены инфекционными поражениями, среди которых хламидийные встречаются наиболее часто.

Клиническую диагностику хламидиоза затрудняют длительное бессимптомное течение, нехарактерные клинические проявления, неэффективность иммунохимических и серологических методов анализа, дороговизна, длительность и трудоемкость микробиологического метода.

ТЕХНИКА ВЗЯТИЯ МАТЕРИАЛА Прежде чем рассматривать методы лабораторной диагностики хламидийной инфекции, необходимо рассмотреть технику взятия материала, поскольку данная процедура входит один из самых ответственных этапов диагностики хламидиоза – этап забора материала.

При исследовании на хламидии методом заражения культуры клеток перед взятием материала больные не должны принимать в течение месяца антибиотики тетрациклинового ряда; при цитологической методике, в том числе и при использовании моноклональных флюоресцирующих антител, антибиотики не следует применять за две недели до исследования. Перед взятием материала из уретры больные не должны мочиться в течение 1-1,5 часа.

При взятии материала на хламидии следует помнить, что оптимальным для присутствия и размножения хламидий являются определенные участки цилиндрического эпителия мочеполовых путей (передняя уретра на глубине 2,5-4 cм у мужчин, слизистая оболочка цервикального канала матки на глубине 1,5 см у женщин).

При взятии материала из шейки матки ключевым моментом является удаление слизистой пробки. От тщательности проведения этой подготовительной процедуры во многом зависит правильность соскоба клеток цервикального канала.

Слизистую пробку удаляют ватным тампоном и пинцетом, а затем берут материал специальной щеточкой cervex brush или voba-brush, имеющей ряд преимуществ, так как для получения репрезентативного результата важно присутствие в образце клеток со всей поверхности цервикального канала, зоны трансформации.

Достаточно информативным является исследование у мужчин осадка первой порции утренней мочи методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Забор материала у девочек производится со слизистой оболочки преддверия влагалища, в отдельных случаях — из заднего свода влагалища через гименальные кольца. Объектом исследования на наличие хламидий могут быть смывы со слизистой оболочки глаз, носоглотки, мокрота, бронхоальвеолярный смыв.

ЛАБОРАТОРНЫЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ

Цитоскопические методы.

При цитоскопическом методе одновременно с поиском цитоплазматических клеток-включений Гальбершедтера-Провачека учитывается количество лейкоцитов как показателя воспаления, а также дополнительная информация о наличии сопутствующей бактериальной микрофлоры, дрожжеподобных грибов, трихомонад и т.п. Цитоскопический метод широко доступен, но эффективен лишь при острых формах инфекции, значительно менее эффективен и информативен при хронических формах заболевания.

Иммуноморфологические методы. Эти методы основаны на обнаружении антигенных субстанций хламидий в эпителии и других тканях путем обработки препаратов антителами. Антитела диагностической антихламидийной сыворотки соединены с какой-либо меткой — люминесцирующей (ФИТЦ-антитела) или ферментной (энзим-меченые антитела).

Прямая иммунофлюоресценция (ПИФ). Этот метод предусматривает прямое выявление антигенов хламидий.

При люминесцентной микроскопии хламидийные включения определяются в виде образований в клетке эпителия с зеленой или желто-зеленой флюоресценцией на коричнево-оранжевом фоне цитоплазмы клеток. Включения могут иметь зернистую, гомогенную или смешанную структуру.

Диагностическая информативность ПИФ связана с тем, что с ее помощью выявляются не только корпускулярные, но и растворимые антигены хламидий.

Непрямой метод иммунофлюоресценции. Непрямой метод иммунофлюоресценции применяют в тех случаях, когда нет в наличии ФИТЦ-конъюгата антихламидийных антител.

В этих случаях приготовленный тем же методом, что и для ПИФ препарат из клинических проб обрабатывают вначале антихламидийными антителами, полученными путем иммунизации хламидиями овец, кроликов, мышей или других животных, а затем второй сывороткой, специфичной для вида животного, которое было иммунизировано хламидиями. Антитела второй сыворотки конъюгированы с ФИТЦ.

Методы иммуноферментного анализа. Эти методы основаны на обнаружении растворимого антигена хламидий в исследуемых пробах. Чаще всего в клинической практике применяются наборы реагентов, основанные на методе твердофазного ИФА-анализа для определения антигенов хламидий.

Твердая фаза покрыта хламидийными моноклональными антителами установленной специфичности. Амплификация достигается с использованием технологии полимерной конъюгации, в результате чего происходит фиксация, при которой на каждый связанный участок антигена приходится полимерный комплекс с высокомолекулярным фрагментом.

Кроме того, амплификация выполняется на стадии обозначенного воспроизведения с использованием запатентованной технологии фермент-амплификации. Визуально положительные пробы окрашиваются в желто-оранжевый цвет. Интенсивность окраски пропорциональна количеству антигена хламидии.

Точный результат исследования определяют с помощью специальных аппаратов для ИФА.

Выделение хламидий в культуре клеток МсСоу. Одним из лучших, но в то же время наиболее трудоемким, является метод диагностики хламидий путем выделения возбудителя в культуре клеток, обработанных различными антиметаболитами («золотой стандарт»).

Для этой цели обычно используют чувствительную культуру клеток, обработанную циклогексимидом. Чувствительность культурального метода по сравнению с ПЦР составляет 70-80%, но в то же время он превосходит молекулярно-биологические методы диагностики по специфичности.

Культуральный метод является референс-методом при оценке эффективности антибактериального лечения. При исследовании биопроб методом ПЦР после курса химиотерапии в некоторых случаях можно получить «ложноположительные с клинической точки зрения» результаты. Это связано с тем, что невозможно однозначно оценить жизнеспособность и патогенность микробной клетки на основании выявления фрагмента ее генома, используя только данные молекулярно-биологических методов. В этом случае при исследовании клинического материала с помощью культурального посева микробные клетки, потерявшие эти важные с клинической точки зрения свойства, не дадут роста в клеточной культуре.

Диагностика методом полимеразой цепной реакции (ПЦР).

Экстремально высокие показатели чувствительности и специфичности ПЦР делают эту методику во многом революционной в лабораторной диагностике, но, несмотря на это, особое внимание при его использовании следует уделять, без сомнения, вопросам правильной интерпретации получаемых результатов.

Основными мишенями при выявлении хламидии трахоматис методом ПЦР являются нуклеотидная последовательность видоспецифической криптической плазмиды, последовательность генома главного белка внутренней мембраны, рибосомальные гены.

По сравнению с широко применяющимися иммунологическими тестами ПЦР-диагностика обладает рядом преимуществ: (1) высокая и регулируемая специфичность, обусловленная лишь нуклеотидной последовательностью, применяемой в данной диагностической системе; (2) высокая чувствительность, позволяющая диагностировать не только острые, но и латентные инфекции (возможно выявление даже единичных бактерий или вирусов); (3) химическое сходство всех нуклеиновых кислот позволяющих разрабатывать универсальные процедуры для выявления различных инфекционных агентов; (4) возможность идентификации возбудителя в течение 4,5-5 часов.

Обратите внимание. В настоящее время не существует лабораторного метода, позволяющего избежать как ложноположительных, так и ложноотрицательных результатов.

При диагностике хламидиоза необходима комплексная лабораторная диагностика (ПИФ, ИФА, культуральный метод, ПЦР, выявление титров антител к антигенам возбудителя), позволяющая выявить возбудителя, определить стадию заболевания, обосновать необходимость назначения антибактериальных препаратов.

Изучение иммунного статуса и обоснованное применение иммуномодуляторов позволит повысить эффективность лечения в отдаленные после заражения сроки.

Источник: http://doctorspb.ru/articles.php?article_id=1409

Ссылка на основную публикацию
Adblock
detector